网状纤维染色液(改良Gomori银氨法)

商品介绍：

用途：

网状纤维染色，可区分胶原纤维

注意事项：

网状纤维染色中leagene公司推荐采用该试剂盒。见光易分解，使用前恢复至室温，网状纤维呈黑色。该法为改良型，省略调色等色步骤。

储存条件：4℃，避光，3个月
公司产品仅供科研使用，下列是产品属性：

实验步骤：

(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀

(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次

(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)

(7)10,000rpm,4℃离心20min

(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃离心20 min

(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC处理水溶解

(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量

(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)

操作程序：

注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。

1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。

2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。

3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。

4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。

5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。

6.后固定：消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。

7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。

8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。

9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。

10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗

11.滴加化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。

12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。

13.滴加化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。

14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。

15.必要时苏木素复染，充分水洗。

16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。

注意事项：

①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

②使用干净的塑料容器配置洗涤液。

③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

IL1RN Protein Human 重组人 IL-1RA / IL1RN 蛋白

Secretin 分泌素(抗原 0.5mgSecretin 分泌素(抗原)

HA重组甲型流感 H5N1 (A/Hong Kong/483/97) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签) Protein

STMN1 Protein Human 重组人 STMN1 / Stathmin 1 蛋白 (His 标签)

S100A7重组人 S100A7 / PSOR1 蛋白 Protein

SEMA3A重组小鼠 Semaphorin 3A / SEMA3A 蛋白 (Fc 标签) Protein

N-myc下游调节基因2(NDRG2)重组蛋白 Recombinant N-myc Downstream Regulated Gene 2 (NDRG2)

CD3D重组人 CD3d / CD3 delta 蛋白 (Fc & FLAG 标签) Protein

CA4 Protein Human 重组人 Carbonic Anhydrase IV / CA4 蛋白 (His 标签)

PDGFC Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 PDGF-C / PDGFC 蛋白 (Fc 标签)

P-selectin P选择素抗原 0.5mgP-selectin P选择素抗原

CA4 Protein Human 重组人 Carbonic Anhydrase IV / CA4 蛋白 (His 标签)

HA重组甲型流感 H5N1 (A/Hubei/2011) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签) Protein

EFNA3 Protein Human 重组人 Ephrin-A3 / EFNA3 蛋白

ICAM3重组人 CD50 / ICAM-3 蛋白 (His 标签) Protein

SLC3A2 Protein Mouse 重组小鼠 SLC3A2 / CD98 蛋白 (His 标签)

HSP-70 peptide 热休克蛋白-70(多肽抗原 0.5mgHSP-70 peptide 热休克蛋白-70(多肽抗原)

EPO重组食蟹猴 Erythropoietin / EPO 蛋白 (His 标签) Protein

SEMA4A重组人 Semaphorin 4A / SEMA4A / Semaphorin B 蛋白 (His 标签) Protein

LY86 Protein Human 重组人 LY86 / MD-16 蛋白 (Fc 标签)
网状纤维染色液(改良Gomori银氨法)红色红曲霉 N-Boc-2,5-二氢-1H-吡咯6-磷酸果糖激Elisa

葡萄座腔 烯酸乙氧基乙氧基乙酯山梨氧化Elisa

赖芽胞杆属 N(α)-Boc-L-2,3-二蔗糖转运体Elisa

禾赤镰孢 2-溴蒽糖转运蛋白Elisa

Debaryomyces prosopidis 双(频哪合)二单糖转运蛋白Elisa

土曲霉 5-溴-2-噻吩羧酸马铃薯病YElisa

枯草芽孢杆 甘-15N马铃薯病AElisa

树舌 3--4-吡啶甲马铃薯病SElisa

饲料类芽孢杆 维洛马铃薯病MElisa

慢生根瘤 trans-4-(4-ethylcyclohexyl)benzonitrile谷氨酰Elisa

香菇 (R)-1-Boc-3-羧基吡咯烷尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化Elisa

ATCC 700324 4,4′-二叔丁基-2,2′-联吡啶赤霉合成Elisa

澳型核果褐腐病 氘代吡啶-d5花青Elisa

截形炭团 4,4'-二甲氧基二苯甲萘乙酸Elisa

球孢白僵 β-D-别吡喃糖赤霉8Elisa