Masson三色染色液(固绿法)

商品介绍：

用途：

经典胶原纤维染色，可区分胶原纤维和肌纤维。

注意事项：

染核后能更容易区分胶原纤维和肌纤维，本试剂盒采用经典的Weigert苏木素。其结果为：胶原纤维呈蓝色，胞核呈蓝褐色肌纤维、红细胞等呈红色。

储存条件：室温，避光，12个月
公司产品仅供科研使用，下列是产品属性：

实验步骤：

(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀

(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次

(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)

(7)10,000rpm,4℃离心20min

(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃离心20 min

(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC处理水溶解

(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量

(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)

操作程序：

注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。

1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。

2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。

3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。

4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。

5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。

6.后固定：消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。

7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。

8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。

9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。

10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗

11.滴加化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。

12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。

13.滴加化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。

14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。

15.必要时苏木素复染，充分水洗。

16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。

注意事项：

①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

②使用干净的塑料容器配置洗涤液。

③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

IL36RN Protein Human 重组人 IL1F5 / IL36RN 蛋白

SATB1(special AT-rich sequence binding protein 0.5mgSATB1(special AT-rich sequence binding protein) 核基质结合区结合蛋白1抗原

HA重组甲型流感 H5N1 (A/chicken/India/NIV33487/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签) Protein

MSLN Protein Human 重组人 MSLN / Mesothelin 蛋白 (Fc 标签), Biotinylated

TGM2重组人 TGM2 / Transglutaminase 2 蛋白 (His 标签) Protein

TNF重组小鼠 TNF-alpha / TNFA 蛋白 Protein

CCR-6/CD196 peptide 细胞表面趋化因子受体6抗原 0.5mgCCR-6/CD196 peptide 细胞表面趋化因子受体6抗原

CNTN4重组人 Contactin 4 / CNTN4 蛋白 (His 标签) Protein

CA7 Protein Human 重组人 Carbonic Anhydrase VII / CA7 蛋白 (His 标签)

IL22RA2 Protein Rat 重组大鼠 IL22BP / L22RA2 蛋白 (Fc 标签)

CCR-6/CD196 peptide 细胞表面趋化因子受体6抗原 0.5mgCCR-6/CD196 peptide 细胞表面趋化因子受体6抗原

CA7 Protein Human 重组人 Carbonic Anhydrase VII / CA7 蛋白 (His 标签)

TNF重组小鼠 TNF-alpha / TNFA 蛋白 Protein

IL22RA2 Protein Rat 重组大鼠 IL22BP / L22RA2 蛋白 (Fc 标签)

CNTN4重组人 Contactin 4 / CNTN4 蛋白 (His 标签) Protein

SIRPG Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 SIRPG / SIRP gamma / CD172g 蛋白 (His 标签)

不均一核糖核蛋白A2/B1(HNRPA2B1)重组蛋白 Recombinant Heterogeneous Nuclear Ribonucleoprotein A2/B1 (HNRPA2B1)

CNTN3重组小鼠 Contactin 3 / CNTN3 蛋白 (His 标签) Protein

REG4重组人 REG4 / RELP / GISP 蛋白 (His 标签) Protein

UNG Protein Human 重组人 Uracil-DNA glycosylase / UNG 蛋白 (GST 标签)
Masson三色染色液(固绿法)茯苓 3--1-金刚烷海藻糖6磷酸合Elisa

闪光须霉 3-溴酮酸乙酯β-基合成Elisa

米曲霉 DL-α-甲氧基硫酸Elisa

谷棒杆 3-溴-4-吡啶甲1--1-羧酸环烷Elisa

香草兰根疾 3,5-二溴-4-吡啶甲乙酸氧化Elisa

鞘氨单胞属 4-甲基-N-氧化物 一水合物维生DElisa

葡萄座腔 4-硝基茴香硫β－硫代葡萄糖苷水解Elisa

苏云金芽胞杆库尔斯塔克亚种 2-溴-1-氟-4-色P450Elisa

Marivirga tractuosa 3,4-二甲氧基苯硫丝裂原活化蛋白激20Elisa

蜡状芽孢杆 甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷半水合物原卟啉原氧化Elisa

食树脂新鞘氨 4-氟-1-茚酮查尔酮还原Elisa

光孢黄丛枝珊瑚 壬基-β-D-吡喃葡糖苷4CL-肉桂酸4-羟基化Elisa

约曼漆斑 3--4-吡唑甲酸乙酯天冬酰合成Elisa

金黄色葡萄球金黄亚种 3-氟-5-甲氧基苯甲β内酰Elisa

Pseudarthrobacter 双(三-o-甲苯磷)钯(0)α半乳糖苷Elisa