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肌纤维染色液(Puchtler鞣酸偶氮荧光桃红法)

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  • 上海上海市

更新时间:2022-06-24

有效日期:还剩356

产品详情

商品介绍:

用途:

肌纤维染色,可区分肌纤维和胶原纤维

注意事项:

肌纤维和肌上皮细胞呈玫瑰红色,胶原纤维呈黄色。

储存条件:4℃,避光,12个月
公司产品仅供科研使用,下列是产品属性:

产品名称

英文名称

规格

货号

肌纤维染色液(Puchtler鞣酸偶氮荧光桃红法)


5×50ml

LZ-01X6900

 

图片1.png 


实验步骤:

(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀

(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次

(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)

(7)10,000rpm,4℃离心20min

(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃离心20 min

(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC处理水溶解

(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量

(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)

操作程序:

注意:最重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。

1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。

2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。

3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。

4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。

5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型,混匀),37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。

6.后固定:消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。

7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。

8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。

9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。

10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗

11.滴加化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。

12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。

13.滴加化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。

14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。

15.必要时苏木素复染,充分水洗。

16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。

注意事项:

①加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。

②使用干净的塑料容器配置洗涤液。

③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。

⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。

⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。

⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。

⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

ICAM3 Protein Human 重组人 CD50 / ICAM-3 蛋白 (His & Fc 标签)

rh-TNF alpha protein GST Tagged 重组人坏死因子 100ugrh-TNF alpha protein GST Tagged 重组人坏死因子

HA重组乙型流感 (B/Malaysia/2506/2004) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签) Protein

NPC2 Protein Human 重组人 Niemann-Pick disease type C2 / NPC2 蛋白 (His 标签)

ERBB3重组人 HER3 / ErbB3 蛋白 (His 标签) Protein

CTNNB1重组小鼠 beta-Catenin / CTNNB1 蛋白 (His & GST 标签) Protein

低氧诱导因子1α(HIF1α)重组蛋白 Recombinant Hypoxia Inducible Factor 1 Alpha (HIF1a)

PSME2重组人 PSME2 / PA28b 蛋白 (His 标签) Protein

CAMKV Protein Human 重组人 CAMKV 蛋白 (His & GST 标签)

ACVRL1 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 ALK-1 / ACVRL1 蛋白 (Fc 标签)

低氧诱导因子1α(HIF1α)重组蛋白 Recombinant Hypoxia Inducible Factor 1 Alpha (HIF1a)

CAMKV Protein Human 重组人 CAMKV 蛋白 (His & GST 标签)

CTNNB1重组小鼠 beta-Catenin / CTNNB1 蛋白 (His & GST 标签) Protein

ACVRL1 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 ALK-1 / ACVRL1 蛋白 (Fc 标签)

PSME2重组人 PSME2 / PA28b 蛋白 (His 标签) Protein

SERPINF2 Protein Mouse 重组小鼠 SerpinF2 蛋白 (His 标签)

CIDEB peptide CIDEB抗原 0.5mgCIDEB peptide CIDEB抗原

SFRP4重组小鼠 sFRP4 蛋白 (His 标签) Protein

AKR1B1重组人 AKR1B1 蛋白 (His 标签) Protein

HOXA1 Protein Human 重组人 HOXA1 蛋白 (His 标签)
肌纤维染色液(Puchtler鞣酸偶氮荧光桃红法)突孢毛壳 磷酸胍分支也交支链淀粉Elisa

产黄青霉 5-三氟甲基结合态淀粉合成Elisa

大肠埃希 DL-3-丁酸淀粉分支Elisa

季也蒙假丝酵母 酸性大红GR可溶性淀粉合成Elisa

巴西果小克银汉霉 己酸戊酯腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化Elisa

Pseudomonas tremae 4-甲基磺酰苯甲赖氨酰氧化Elisa

吉氏根瘤 N-(4-溴丁基)邻苯二甲酰亚赖氨酰氧化1Elisa

洋葱伯克霍尔德氏 2-甲氧基-1-萘赖氨酰氧化2Elisa

出芽短梗霉 正戊基苯赖氨酰氧化3Elisa

异常威克汉姆酵母 3-苯氧基-1,2-脱镁叶绿Elisa

大肠埃希氏 4-甲磺酰基溴苄磷酸甘油酸激Elisa

黑曲霉 (S)-3-羟基丁酸甲酯BCA蛋白Elisa

Cystofilobasidium 4-苯甲酰肼壁酸性转化Elisa

黑曲霉 2-乙酯色P450羟化Elisa

球孢白僵 5--2-吡啶木质过氧化Elisa



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上海联祖生物科技有限公司

型:
代理商
联系人:
何君

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商家概况

主营产品:
PCR试剂盒、ELISA试剂盒、植物标准、ATCC细胞、菌种
公司性质:
代理商

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