β-半乳糖苷酶染色试剂盒(细胞专用)

公司产品仅供科研使用，下列是产品属性：

商品介绍：

用途：

培养细胞和组织切片的衰老检测，又称X-gal染色液

注意事项：

试剂盒主要由β-半乳糖苷酶固定液、X-gal、半乳糖苷酶染色液等组成。以X-Gal为底物，在衰老特异性的β-半乳糖苷酶催化下会生成深蓝色产物。

储存条件：-20℃，避光，12个月
注意事项：

①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

②使用干净的塑料容器配置洗涤液。

③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

实验步骤：

(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀

(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次

(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)

(7)10,000rpm,4℃离心20min

(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃离心20 min

(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC处理水溶解

(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量

(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)

FGF9 Protein Human 重组人 FGF9 蛋白 (Fc 标签)

RAR-Alpha (Retinoic acid -R-Alpha 0.5mgRAR-Alpha (Retinoic acid -R-Alpha) 维甲酸受体-α 多肽

HA重组甲型流感 H1N1 (A/New York/18/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签) Protein

PRELP Protein Human 重组人 PRELP 蛋白 (Fc 标签)

OLFM4重组人 OLFM4 / GW112 蛋白 (His 标签) Protein

CD14重组大鼠 CD14 蛋白 (His 标签) Protein

Connexin-43(Cx43 0.5mgConnexin-43(Cx43) 间隙连接蛋白43(多肽片断抗原)

HNMT重组人 HNMT / Histamine N-methyltransferase 蛋白 (GST 标签) Protein

CCDC134 Protein Human 重组人 CCDC134 蛋白 (His 标签)

CLEC6A Protein Mouse 重组小鼠 CLEC4N / CLEC6A / Dectin-2 蛋白 (His 标签)

Connexin-43(Cx43 0.5mgConnexin-43(Cx43) 间隙连接蛋白43(多肽片断抗原)

CCDC134 Protein Human 重组人 CCDC134 蛋白 (His 标签)

CD14重组大鼠 CD14 蛋白 (His 标签) Protein

CLEC6A Protein Mouse 重组小鼠 CLEC4N / CLEC6A / Dectin-2 蛋白 (His 标签)

HNMT重组人 HNMT / Histamine N-methyltransferase 蛋白 (GST 标签) Protein

SERPINA10 Protein Mouse 重组小鼠 SerpinA10 / ZPI 蛋白 (His 标签)

GDF8/MSTN(growth differntiation factor 8 0.1mgGDF8/MSTN(growth differntiation factor 8) 重组生长分化因子8/肌肉抑制素

ERBB3重组大鼠 HER3 / ErbB3 蛋白 (His 标签) Protein

MUC1重组人 Mucin-1 / MUC-1 蛋白 (Fc 标签)(Fc 标签) Protein

IgG3 Protein Human 重组人 IgG3-Fc / IGHG3 蛋白
β-半乳糖苷酶染色试剂盒(细胞专用)黑木耳 4'-氟苯酮二乙烯原叶绿酸酯Elisa

黑曲霉 3,4-二氟油菜类固Elisa

下节杆 间氟木葡聚糖内糖基转水解Elisa

解淀粉芽孢杆 3-溴-4-三氟甲苯维生KElisa

枯草芽孢杆 1-异基咪唑Flag标签Elisa

 3-氟-4-甲苯异分支酸合Elisa

小链霉 2,4-二氟甲苯异分支酸裂解Elisa

绳生毛壳 2-氟-4-甲苯叶绿降解过氧化物Elisa

酿酒酵母 2--4-氟甲苯脂肪酸分解Elisa

黑木耳(186) 4-氟-2-甲基转移1Elisa

巨大芽孢杆 4-氟-3-磷脂酸磷酸酯Elisa

Candida 2,5-二氟甲苯羟化Elisa

变平滑假丝酵母 2-溴-5-氟甲苯异分支酸合成Elisa

柴油食烷 4-(4-甲氧基苯基)丁酸异分支酸裂解Elisa

Enterobacter cowanii Inoue et al.  2,3-二氟丝蛋白抑制剂Elisa

操作程序：

注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。

1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。

2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。

3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。

4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。

5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。

6.后固定：消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。

7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。

8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。

9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。

10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗

11.滴加化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。

12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。

13.滴加化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。

14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。

15.必要时苏木素复染，充分水洗。

16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。