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蔗糖-PBS溶液(5%)

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更新时间:2022-06-24

有效日期:还剩358

产品详情

商品介绍:

用途:

新鲜组织取材后,沉淀以去除多余水分,避免冷冻后产生冰晶

注意事项:

主要由蔗糖、PBS、防腐剂组成。

储存条件:4℃,6个月
公司产品仅供科研使用,下列是产品属性:

产品名称

英文名称

规格

货号

蔗糖-PBS溶液(5%)


500ml

LZ-01X6927

 

图片1.png 


实验步骤:

(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀

(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次

(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)

(7)10,000rpm,4℃离心20min

(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃离心20 min

(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC处理水溶解

(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量

(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)

操作程序:

注意:最重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。

1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。

2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。

3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。

4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。

5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型,混匀),37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。

6.后固定:消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。

7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。

8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。

9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。

10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗

11.滴加化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。

12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。

13.滴加化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。

14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。

15.必要时苏木素复染,充分水洗。

16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。

注意事项:

①加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。

②使用干净的塑料容器配置洗涤液。

③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。

⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。

⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。

⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。

⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

ESAM Protein Human 重组人 ESAM / Endothelial Cell Adhesion Molecule 蛋白

Ractopamine/KLH 莱克多巴胺与血蓝蛋白偶联物 1mgRactopamine/KLH 莱克多巴胺与血蓝蛋白偶联物

NA重组甲型流感 H5N1 神经氨酸酶 (Neuraminidase / NA) (H274Y mutation) (高活性) Protein

CCL13 Protein Human 重组人 CCL13 / MCP-4 蛋白 (His 标签)

GFRA2重组人 GFRA2 / GFRα2 / GDNFRB 蛋白 (His 标签) Protein

NA重组甲型流感 H5N1 神经氨酸酶 (Neuraminidase / NA) (H274Y mutation) (高活性) Protein

Ractopamine/KLH 莱克多巴胺与血蓝蛋白偶联物 1mgRactopamine/KLH 莱克多巴胺与血蓝蛋白偶联物

GFRA2重组人 GFRA2 / GFRα2 / GDNFRB 蛋白 (His 标签) Protein

CCL13 Protein Human 重组人 CCL13 / MCP-4 蛋白 (His 标签)

ESAM Protein Human 重组人 ESAM / Endothelial Cell Adhesion Molecule 蛋白

Ractopamine/KLH 莱克多巴胺与血蓝蛋白偶联物 1mgRactopamine/KLH 莱克多巴胺与血蓝蛋白偶联物

CCL13 Protein Human 重组人 CCL13 / MCP-4 蛋白 (His 标签)

NA重组甲型流感 H5N1 神经氨酸酶 (Neuraminidase / NA) (H274Y mutation) (高活性) Protein

ESAM Protein Human 重组人 ESAM / Endothelial Cell Adhesion Molecule 蛋白

GFRA2重组人 GFRA2 / GFRα2 / GDNFRB 蛋白 (His 标签) Protein

SEMA4D Protein Rat 重组大鼠 Semaphorin 4D / SEMA4D / CD100 蛋白 (Fc 标签)

ASPP1(apoptosis stimulating protein of P53 1 0.5mgASPP1(apoptosis stimulating protein of P53 1) p53凋亡刺激蛋白1抗原

EFNA1重组小鼠 Ephrin-A1 / EFNA1 蛋白 (His 标签) Protein

ALDH4A1重组人 ALDH4A1 蛋白 (His & GST 标签) Protein

NRXN3 Protein Human 重组人 Neurexin-3-beta / NRXN3 蛋白 (Fc 标签)
蔗糖-PBS溶液(5%)黄曲霉 双水杨酯异淀粉Elisa

海科贝特氏 1-磺酰哌ADPElisa

孔雀石绿链霉 5-溴-3-甲基-1H-吲唑叶绿b还原Elisa

紫红曲霉 5-溴-2,3-二氢异-1-酮叶绿代谢产物还原Elisa

贝伦格葡萄座腔梨生专化型 2--5-甲基吡褪黑色合成Elisa

紫芝 5-甲基吡-2-羧酰类胡萝卜裂解双加氧Elisa

微小杆 吩-1-甲酰蔗糖合成分解方向Elisa

植物乳杆 6--7-氮杂精脱亚氨Elisa

齐藤土星形酵母 7-氧代-7-氮杂β-微管蛋白Elisa

彩色豆马勃 3-((2-巯基-1-甲基基)硫)-2-丁蛋白激CElisa

茄劳尔氏 3-溴-6-羟基-2-蛋白激BElisa

冻胶假丝酵母 5--2-甲氧基蛋白激KElisa

球孢白僵 1,2-二-(3-氧基)乙烷脉斑驳病Elisa

 2,3-二三氟甲苯褪绿病Elisa

鸡葡萄球 3-溴-1,5-二氢-4H-吡唑并[3,4-D]嘧啶-4-酮轻斑驳病Elisa



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上海联祖生物科技有限公司

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代理商
联系人:
何君

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商家概况

主营产品:
PCR试剂盒、ELISA试剂盒、植物标准、ATCC细胞、菌种
公司性质:
代理商

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