碱性磷酸酶染色液(改良Gomori钙钴法)

公司产品仅供科研使用，下列是产品属性：

商品介绍：

用途：

碱性磷酸酶染色，适用于石蜡切片

注意事项：

属于金属沉淀法，碱性磷酸酶活性出呈棕黑色，可能出现假阳性，采用阴性对照。二甲苯应采用AR以上级别。

储存条件：4℃，避光，6个月
注意事项：

①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

②使用干净的塑料容器配置洗涤液。

③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

实验步骤：

(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀

(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次

(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)

(7)10,000rpm,4℃离心20min

(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃离心20 min

(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC处理水溶解

(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量

(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)

操作程序：

注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。

1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。

2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。

3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。

4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。

5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。

6.后固定：消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。

7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。

8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。

9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。

10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗

11.滴加化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。

12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。

13.滴加化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。

14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。

15.必要时苏木素复染，充分水洗。

16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。

EPOR Protein Human 重组人 EPOR / Erythropoietin Receptor 蛋白 (Fc 标签)

PTEN/MMAC1(CT 0.5mgPTEN/MMAC1(CT)human, mo, rat, pig, dog, bovine, horse, chicken 一种抑制基因抗原(C端)

HA重组乙型流感 (B/Florida/4/2006) 血凝素HA2 (Hemagglutinin) 蛋白 (Fc 标签) Protein

SBDS Protein Human 重组人 SBDS / Shwachman-Bodian-Diamond syndrome 蛋白 (His 标签)

AACS重组人 AACS / Acetoacetyl-CoA Synthetase 蛋白 (His 标签) Protein

XCL1重组小鼠 XCL1 蛋白 (His 标签) Protein

白介素2(IL2)重组蛋白 Recombinant Interleukin 2 (IL2)

CKB重组人 CKB / Creatine kinase B type 蛋白 (His 标签) Protein

CCL15 Protein Human 重组人 CCL15 / MIP-5 / MIP-1 delta 蛋白 (aa 22-113， His 标签)

IL2RA Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 IL2RA 蛋白

Apelin receptor/APJ receptor Apelin receptor抗原 0.5mgApelin receptor/APJ receptor Apelin receptor抗原

CCL15 Protein Human 重组人 CCL15 / MIP-5 / MIP-1 delta 蛋白 (aa 22-113， His 标签)

EPHA4重组小鼠 EphA4 / HEK8 蛋白 (His 标签) Protein

CD70 Protein Rat 重组大鼠 CD70 / CD27L / TNFSF7 蛋白 (Fc 标签)

MFGE8重组人 MFG-E8 / lactadherin / MFGE8 蛋白 (His 标签) Protein

SELPLG Protein Mouse 重组小鼠 PSGL-1 / CD162 / SELPLG 蛋白

p27 (cyclin-dependent kinase inhibitor 1B 0.5mgp27 (cyclin-dependent kinase inhibitor 1B) p27(抗原)

TNF重组狗 TNF-alpha / TNFA / TNFSF1A 蛋白 Protein

FAS重组人 FAS / CD95 / APO-1 / TNFRSF6 蛋白 (His 标签) Protein

MMGT1 Protein Human 重组人 MMGT1 / EMC5 蛋白 (His 标签)
碱性磷酸酶染色液(改良Gomori钙钴法)羊毛状青霉 醋酸铈水合物红色叶绿降解产物还原Elisa

粘质沙雷氏 3-叔丁基苯脱氢抗坏血酸还原Elisa

湖泊微杆 3-甲苯肼氧化还原Elisa

缺陷假单胞 亚酰苯二磷酸鸟苷Elisa

新月弯孢 3--4-羟基甲酯一磷酸鸟苷Elisa

枯草芽孢杆 2-甲基-3-噻吩甲酸甲酯苹果茎沟病Elisa

溶血隐秘杆 4--2-甲番茄红Elisa

慢生根瘤 4,5-二甲基-2-巯基噻唑纤维二糖水解Elisa

四川散斑壳 4-(溴乙酰基)吡啶氢盐蔗糖转化Elisa

中国拟迷孔 4,7-双(5-溴-2-噻吩基)-2,1,3-苯并硒二唑木糖Elisa

波兰青霉 邻硫脲木聚糖酯Elisa

酮丛毛单胞 甲基磺酸锡纤维二糖水解Elisa

日本根霉 1H--1-核苷二磷酸激AElisa

香菇 四氢吡喃-4-甲酸核苷二磷酸激AElisa

耐热芽孢芽孢杆 N,N,2,2-四甲基-1,3-二6-磷酸山梨脱氢Elisa