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乳酸脱氢酶染色液(四唑盐法)

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更新时间:2022-06-24

有效日期:还剩355

产品详情

公司产品仅供科研使用,下列是产品属性:

产品名称

英文名称

规格

货号

乳酸脱氢酶染色液(四唑盐法)


2×50ml

LZ-01X6946

 

图片1.png 

商品介绍:

用途:

乳酸脱氢酶染色

注意事项:

主要由四氮唑蓝孵育液、阴性对照组成。染色后酶活性部位呈蓝紫色沉淀。

储存条件:4℃,避光,6个月
注意事项:

①加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。

②使用干净的塑料容器配置洗涤液。

③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。

⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。

⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。

⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。

⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

实验步骤:

(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀

(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次

(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)

(7)10,000rpm,4℃离心20min

(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃离心20 min

(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC处理水溶解

(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量

(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)

操作程序:

注意:最重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。

1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。

2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。

3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。

4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。

5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型,混匀),37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。

6.后固定:消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。

7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。

8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。

9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。

10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗

11.滴加化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。

12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。

13.滴加化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。

14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。

15.必要时苏木素复染,充分水洗。

16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。

ECE2 Protein Human 重组人 ECE-2 蛋白 (Fc 标签)

Protein A 蛋白A 1mgProtein A 蛋白A

NA重组甲型流感 H3N2 神经氨酸酶 (Neuraminidase / NA) (H274Y mutation) (高活性) Protein

NRBF2 Protein Human 重组人 NRBF2 / Nuclear receptor binding factor 2 蛋白 (His & GST 标签)

SPINK4重组人 SPINK4 蛋白 (His 标签) Protein

FLT1重组大鼠 VEGFR1 / FLT-1 蛋白 (His 标签) Protein

Endothelin-1 内皮素-1(多肽抗原 0.5mgEndothelin-1 内皮素-1(多肽抗原)

GPNMB重组人 GPNMB / Osteoactivin 蛋白 (His 标签) Protein

CCL22 Protein Human 重组人 CCL22 / MDC 蛋白 (His 标签)

TNFRSF1A Protein Mouse 重组小鼠 TNFR1 / CD120a / TNFRSF1A 蛋白 (His 标签)

Endothelin-1 内皮素-1(多肽抗原 0.5mgEndothelin-1 内皮素-1(多肽抗原)

CCL22 Protein Human 重组人 CCL22 / MDC 蛋白 (His 标签)

FLT1重组大鼠 VEGFR1 / FLT-1 蛋白 (His 标签) Protein

TNFRSF1A Protein Mouse 重组小鼠 TNFR1 / CD120a / TNFRSF1A 蛋白 (His 标签)

GPNMB重组人 GPNMB / Osteoactivin 蛋白 (His 标签) Protein

SELE Protein Rat 重组大鼠 E-Selectin / CD62e / SELE 蛋白 (Fc 标签)

Caspase-10 半胱胺酸蛋白酶-10(抗原 0.5mgCaspase-10 半胱胺酸蛋白酶-10(抗原)

TLR3重组小鼠 TLR3 / CD283 蛋白 (His 标签) Protein

JAM3重组人 JAM3 / JAM-C 蛋白 (Fc 标签) Protein

TNFSF10 Protein Human 重组人 TNFSF10 / TRAIL / APO-2L / CD253 蛋白
乳酸脱氢酶染色液(四唑盐法)产氨短杆 6-叔丁基-3H-噻吩[2,3-D]嘧啶-4-酮III型前胶原Elisa

 4-异基苯乙IV型胶原Elisa

华特根瘤 4-异基苯I型胶原Elisa

芽胞杆 Fmoc-L-羟脯苄酯I型前胶原Elisa

蜡样芽孢杆 肉桂基溴I型前胶原羧基端肽Elisa

马泰勒虫(青海刚察株) 七甲基壬烷I型前胶原N端前肽Elisa

枯草芽孢杆 还原橙 3L-谷脱氢Elisa

牛瘟病 2-(甲基)喹啉N2乙酰受体IgGElisa

副结核补体结合试验(-)阴性血清 3-苯基-5-异噁唑N2乙酰受体IgG1Elisa

土壤短芽胞杆 3-溴-5-(三氟甲基)吡啶N2乙酰受体IgG2Elisa

琥珀乳牛肝 3,4,5-三苯酸Na-K-ATPElisa

大肠埃希 5-溴-2-茚满N端前脑钠Elisa

干酪乳杆 1-烯基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐N-乙酰-β-D-葡萄糖苷Elisa

贝莱斯芽胞杆 3-氟-5--4-甲酸骨膜蛋白Elisa

灰离褶伞 洛平Phospho (637)-DRP1Elisa



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上海联祖生物科技有限公司

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商家概况

主营产品:
PCR试剂盒、ELISA试剂盒、植物标准、ATCC细胞、菌种
公司性质:
代理商

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