产品详情
商品介绍:
用途:
常规切片染色
注意事项:
属于明矾苏木素的一种,采用酒精溶液氧化,存储太久后,使用时应过滤,染色时间一般20-45分钟。
储存条件:室温,24个月
公司产品仅供科研使用,下列是产品属性:
产品名称 | 英文名称 | 规格 | 货号 |
Cole苏木素染色液 | 100ml|500ml | LZ-01X6958 |
实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作程序:
注意:最重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型,混匀),37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
注意事项:
①加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
DKK1 Protein Human 重组人 DKK1 / Dkk-1 蛋白 (His 标签)
PPAR-delta (peroxisome proliferator-activated receptor 0.5mgPPAR-delta (peroxisome proliferator-activated receptor) D型-过氧化酶活化增生受体(多肽)
NP重组甲型流感 H2N2 核蛋白 (Nucleoprotein / NP) (His 标签) Protein
LIPF Protein Human 重组人 Gastric lipase / LIPF 蛋白 (His 标签)
ABHD4重组人 ABHD4 蛋白 (His 标签) Protein
HA重组甲型流感 H15N8 (A/duck/AUS/341/1983) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 标签) Protein
rHBsAg 重组乙肝病毒表面抗原 100ugrHBsAg 重组乙肝病毒表面抗原
ICOS重组人 ICOS / AILIM / CD278 蛋白 (His & Fc 标签) Protein
CCL4 Protein Human 重组人 CCL4 / MIP1B 蛋白 (His 标签)
HGFA Protein Human 重组人 HGFA 蛋白 (His 标签)
rHBsAg 重组乙肝病毒表面抗原 100ugrHBsAg 重组乙肝病毒表面抗原
CCL4 Protein Human 重组人 CCL4 / MIP1B 蛋白 (His 标签)
HA重组甲型流感 H15N8 (A/duck/AUS/341/1983) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 标签) Protein
HGFA Protein Human 重组人 HGFA 蛋白 (His 标签)
ICOS重组人 ICOS / AILIM / CD278 蛋白 (His & Fc 标签) Protein
SDF2 Protein Mouse 重组小鼠 SDF2 / SDF-2 蛋白 (His 标签)
HGV(Hepatitis G vivus 0.5mgHGV(Hepatitis G vivus) 庚型肝炎病毒(抗原)
IL1R1重组大鼠 IL1R1 / CD121a 蛋白 (His & Fc 标签) Protein
MAP2K2重组人 MEK2 / MAP2K2 / MKK2 蛋白 (GST 标签) Protein
PHYH Protein Human 重组人 PHYH 蛋白
Cole苏木素染色液髓囊毕赤酵母 4--3-氟苯甲低密度脂蛋白受体Elisa
聚贪噬 3,5-二甲氧基低氧诱导因子-1Elisa
芽孢乳酸干粉 4--3,5-二氟低氧诱导因子-1αElisa
酿酒酵母 2-氟-5-(甲氧羰基)苯酸抵抗Elisa
豌豆根瘤 2-溴-5--1,4-苯二甲酸抵抗样αElisa
微白黄链霉 4-吡咯烷-1-基淀粉Elisa
河北链霉 4-溴-1,2-二甲基-1H-咪唑淀粉样前体蛋白Elisa
费氏中华根瘤 4-溴-3,5-二氟苯凋亡相关因子Elisa
大肠埃希 3-氟-4-溴苯乙丁酰酯Elisa
酿酒酵母 5-氟吡啶-2-甲酰蕈碱型乙酰受体Elisa
芽枝状枝孢 2--5-甲氧基苯盐酸盐端粒Elisa
葡糖酸醋杆属 2--4-氟苯肼盐酸盐多巴Elisa
杂色曲霉 二乙氧羰基二酰多巴D1受体Elisa
球孢白僵 4-(4-)环己烷甲酸多巴色互变Elisa
栗疫 2-溴-6-乙酰基吡啶乙二保护儿茶Elisa
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