产品详情
商品介绍:
用途:
内分泌细胞颗粒染色
注意事项:
内分泌细胞颗粒呈深蓝-黑色
储存条件:室温,避光,12个月
公司产品仅供科研使用,下列是产品属性:
产品名称 | 英文名称 | 规格 | 货号 |
改良MacConaill铅苏木素染色液 | 140ml | LZ-01X6965 |
实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作程序:
注意:最重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型,混匀),37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
注意事项:
①加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
CST7 Protein Human 重组人 Cystatin 7 / CST7 蛋白 (Fc 标签)
Polycystin 2(polycystic kidney disease 2 0.5mgPolycystin 2(polycystic kidney disease 2) 多囊肾蛋白2抗体
HA重组甲型流感 H1N1 (A/Beijing/22808/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签) Protein
MSRB3 Protein Human 重组人 MSRB3 蛋白 (His 标签)
USP7重组人 USP7 / HAUSP 蛋白 (His & GST 标签) Protein
HPGD重组小鼠 HPGD / 15-PGDH 蛋白 (His 标签) Protein
Bcl2样蛋白11(BCL2L11)重组蛋白 Recombinant Bcl2 Like Protein 11 (BCL2L11)
TMED1重组人 TMED1 蛋白 (Fc 标签) Protein
CCL8 Protein Human 重组人 CCL8 / MCP-2 蛋白 (SUMO 标签)
IL6ST Protein Rat 重组大鼠 gp130 / IL6ST / CD130 蛋白 (His 标签)
Smad同源物7(Smad7)重组蛋白 Recombinant Mothers Against Decapentaplegic Homolog 7 (Smad7)
CCL8 Protein Human 重组人 CCL8 / MCP-2 蛋白 (SUMO 标签)
CHODL重组小鼠 CHODL / Chondrolectin 蛋白 (His 标签) Protein
NOV Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 / 恒河猴 CCN3 / NOV 蛋白 (His 标签)
CNPY2重组人 CNPY2 蛋白 (His 标签) Protein
SDC1 Protein Mouse 重组小鼠 Syndecan-1 / SDC1 / CD138 蛋白 (His 标签)
GAP-43 ( Growth associated protein-43 0.5mgGAP-43 ( Growth associated protein-43 ) 生长相关蛋白-43(抗原)
KIT重组大鼠 KIT / c-KIT 蛋白 (Fc 标签) Protein
CD40LG重组人 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白 (Fc 标签) Protein
IL17A Protein Human 重组人 IL17 / IL17A 蛋白 (His 标签)
改良MacConaill铅苏木素染色液糖化酵母 3-氟-2-酪酪肽Elisa
侧耳 2--6-氟甲苯类风湿因子Elisa
绿色木霉 N-苄氧羰基-DL-蛋类胰蛋白Elisa
芽孢杆属 乙基酸粒集落激因子Elisa
硬毛栓孔 O-琥珀酰亚-1,3-二甲基基脲六氟磷酸盐粒巨噬集落激因子Elisa
拜氏色盐杆 2--4,5-二氟裂解型糖基化终末产物受体Elisa
多根硬皮马勃 1-苄基高哌αElisa
酿酒酵母 N-甲基亚氨二乙酸功能相关抗原1Elisa
平菇 1-二乙基-2-磷酸二酯Elisa
芽枝状枝孢 2-(4-乙氧基苯基)-2-甲基磷酸二酯3BElisa
小马勃 双(2,4,4-基戊基)膦酸磷酸甘油酸激Elisa
溶藻弧 3-乙酰基-7氮杂磷酸果糖激1Elisa
蝉花* 6-叔丁基-4--噻吩[2,3-D]嘧啶磷酸化AKT蛋白Elisa
哈茨木霉 2,4,6-三羟基磷酸化p38丝裂原活化蛋白激Elisa
闪光须霉 4-甲氧基-2,3,5,6-四氟苯甲磷酸化Tau蛋白Elisa
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