BD214010-Agar,BactoTM 细菌琼脂

细菌培养基
琼脂培养基niurougao0.3g ，蛋白胨1.0g，氯化钠0.5g，琼脂1.5g，水100ml
在烧杯内加水100ml，放入niurougao、蛋白胨和氯化钠，用蜡笔在烧杯外作上记号后，放在火上加热。待烧杯内各组分溶解后，加入琼脂，不断搅拌以免粘底。等琼脂*溶解后补足失水，用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.2-7.6，分装在各个试管里，加棉花塞，用高压蒸汽灭菌：1.05千克每平方厘米、121摄氏度维持15-30分钟。

固化试剂，高纯度琼脂，*大程度去除外界杂质、染料成份及盐份，用于固体培养基，浓度通常为 1-2%；用于动力试验和厌氧菌及微需氧菌的生长， 浓度通常为 0.05-0.5%
Bacto Agar针对有益的钙和镁进行了优化内容。有害离子如铁和铜降低。
用途：推荐用于临床应用研究、营养缺陷型研究、细菌和酵母转化研究和细菌分子遗传学应用。
典型技术参数（使用浓度1.5%）：
项目       结果     
灰份       3.6%      
透明度     4.3NTU
水份       17.3%
凝胶强度    600
凝胶点      35℃
熔点        88℃
PH值       6.5
该产品的特点：
优点：灰份低、溶解浊度和磷酸盐浊度方面表现突出，对透明度要求严格的可选择这个产品。缺点：水份偏高，水份虽然不会对细菌生长产生大的影响，水分过高不利于琼脂的长期保存。★ 单组份大肠杆菌 (E • coli ) 研究相关培养基

    ★ 酵母菌 (Yeast) 研究相关培养基
    ★ BD旗下品牌 Bacto^TM, Difco^TM, BBL^TM高品质琼脂
    ★ 高品质*脱脂奶粉 (用于western封闭等)

大肠杆菌 (E • coli) 研究相关培养基

    ★ BD Difco^TM LB 肉汤/琼脂，Miller (Difco^TM LB Broth & Agar, Miller)

 BD Difco^TM 2X YT 培养基 (Difco^TM 2X YT Medium)

 一种加富培养基，用来培养重组大肠杆菌菌株。也用于增殖M13噬菌体来进行序列分析和噬菌体表现的研究。 2 x YT培养基提供的氮源和生长因子使噬菌体在不裂解宿主的情况下大量增殖。 ★ BD Difco^TM 肉汤-提高质粒产量 (Difco^TM Terrific Broth)

一种强化营养的培养基，由Tartof和Hobbs发展而来，主要用于增加带质粒大肠杆菌的产量。重组菌株在培养基中有一个延长的生长时期，额外添加的蛋白胨和酵母提取物能够大大提高质粒的产量。

选择适宜的营养物质
　　总体而言，所有微生物生长繁殖均需要培养基含有碳源、氮源、无机盐、生长因子、水及能源，但由于微生物营养类型复杂，不同微生物对营养物质的需求是不一样的，因此首先要根据不同微生物的营养需求配制针对性强的培养基。自养型微生物能从简单的无机物合成自身需要的糖类、脂类、蛋白质、核酸、维生素等复杂的有机物，因此培养自养型微生物的培养基*可以(或应该)由简单的无机物组成。例如，培养化能自养型的氧化硫硫杆菌(Thiobacillus thiooxdans)的培养基组成见表3.9。在该培养基配制过程中并未专门加入其他碳源物质，而是依靠空气中和溶于水中的CO2为氧化硫硫杆菌提供碳源。
　　就微生物主要类型而言，有细菌、放线菌、酵母菌、霉菌、原生动物、藻类及病毒之分，培养它们所需的培养基各不相同。在实验室中常用niurou膏蛋白胨培养基(或简称普通肉汤培养基)培养细菌，用高氏I号合成培养基培养放线菌，培养酵母菌一般用麦芽汁培养基，培养霉菌则一般用查氏合成培养基。
　　2、营养物质浓度及配比合适
　　培养基中营养物质浓度合适时微生物才能生长良好，营养物质浓度过低时不能满足微生物正常生长所需，浓度过高时则可能对微生物生长起抑制作用，例如高浓度糖类物质、无机盐、重金属离子等不仅不能维持和促进微生物的生长，反而起到抑菌或杀菌作用。另外，培养基中各营养物质之间的浓度配比也直接影响微生物的生长繁殖和(或)代谢产物的形成和积累，其中碳氮比(C/N)的影响较大。严格地讲，碳氮比指培养基中碳元素与氮元素的物质的量比值，有时也指培养基中还原糖与粗蛋白之比。例如，在利用微生物发酵生产谷氨酸的过程中，培养基碳氮比为4/1时，菌体大量繁殖，谷氨酸积累少；当培养基碳氮比为3/1时，菌体繁殖受到抑制，谷氨酸产量则大量增加。再如，在抗生素发酵生产过程中，可以通过控制培养基中*氮(或碳)源与迟效氮(或碳)源之间的比例来控制菌体生长与抗生素的合成协调。
　　3、控制pH条件
　　培养基的pH必须控制在一定的范围内，以满足不同类型微生物的生长繁殖或产生代谢产物。各类微生物生长繁殖或产生代谢产物的zui适pH条件各不相同，一般来讲，细菌与放线菌适于在pH7-7.5范围内生长，酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范围内生长。值得注意的是，在微生物生长繁殖和代谢过程中，由于营养物质被分解利用和代谢产物的形成与积累，会导致培养基pH发生变化，若不对培养基pH条件进行控制，往往导致微生物生长速度下降或(和)代谢产物产量下降。因此，为了维持培养基pH的相对恒定，通常在培养基中加入pH缓冲剂，常用的缓冲剂是一氢和二氢磷酸盐(如KH2PO4 和K2HPO4)组成的混合物。K2HPO4溶液呈碱性，KH2PO4溶液呈酸性，两种物质的等量混合溶液的pH为6.8。当培养基中酸性物质积累导致H+浓度增加时，H+与弱碱性盐结合形成弱酸性化合物，培养基pH不会过度降低；如果培养基中OH-浓度增加，OH-则与弱酸性盐结合形成弱碱性化合物，培养基pH也不会过度升高。
　　但KH2PO4 和K2HPO4缓冲系统只能在一定的pH范围内(6.4-7.2)起调节作用。有些微生物，如乳酸菌能大量产酸，上述缓冲系统就难以起到缓冲作用，此时可在培养基中添加难溶的碳酸盐(如CaCO3)来进行调节，CaCO3难溶于水，不会使培养基pH过度升高，但它可以不断中和微生物产生的酸，同时释放出CO2，将培养基pH控制在一定范围内。
　　在培养基中还存在一些天然的缓冲系统，如氨基酸、肽、蛋白质都属于两性电解质，也可起到缓冲剂的作用。
　　4、控制氧化还原电位(redox potential)
　　不同类型微生物生长对氧化还原电位(F)的要求不一样，一般好氧性微生物在F值为+0.1V以上时可正常生长，一般以+0.3一+0.4V为宜，厌氧性微生物只能在F值低于+0.1V条件下生长，兼性厌氧微生物在F值为+0.1V以上时进行好氧呼吸，在+0.1V以下时进行发酵。F值与氧分压和pH有关，也受某些微生物代谢产物的影响。在pH相对稳定的条件下，可通过增加通气量(如振荡培养、搅拌)提高培养基的氧分压，或加入氧化剂，从而增加F值；在培养基中加入抗坏血酸、硫化氢、半胱氨酸、谷胱甘肽、二硫苏糖醇等还原性物质可降低F值。
　　5、原料来源的选择
　　在配制培养基时应尽量利用廉价且易于获得的原料作为培养基成分，特别是在发酵工业中，培养基用量很大，利用低成本的原料更体现出其经济价值。例如，在微生物单细胞蛋白的工业生产过程中，常常利用糖蜜(制糖工业中含有蔗糖的废液)、乳清(乳制品工业中含有乳糖的废液)、豆制品工业废液及黑废液(造纸工业中含有戊糖和己糖的亚硫酸纸浆)等都可作为培养基的原料。再如，工业上的甲烷发酵主要利用废水、废渣作原料，而在我国农村，已推广利用人畜粪便及禾草为原料发酵生产甲烷作为燃料。另外，大量的农副产品或制品，如鼓皮、米糠、玉米浆、酵母浸膏、酒糟、豆饼、花生饼、蛋白胨等都是常用的发酵工业原料。
　　6、灭菌处理
　　要获得微生物纯培养，必须避免杂菌污染，因此对所用器材及工作场所进行消毒与灭菌。对培养基而言，更是要进行严格的灭菌。对培养基一般采取高压蒸汽灭菌，一般培养基用1.05kg/cm2，121.3℃条件下维持15-30min可达到灭菌目的。在高压蒸汽灭菌过程中，长时间高温会使某些不耐热物质遭到破坏，如使糖类物质形成氨基糖、焦糖，因此含糖培养基常在0.56kg/ cm2，112.6℃15-30分钟进行灭菌，某些对糖类要求较高的培养基，可先将糖进行过滤除菌或间歇灭菌，再与其他已灭菌的成分混合；长时间高温还会引起磷酸盐、碳酸盐与某些阳离子(特别是钙、镁、铁离子)结合形成难溶性复合物而产生沉淀，因此，在配制用于观察和定量测定微生物生长状况的合成培养基时，常需在培养基中加入少量螯合剂，避免培养基中产生沉淀，常用的螯合剂为乙二胺四乙酸(EDTA)。还可以将含钙、镁、铁等离子的成分与磷酸盐、碳酸盐分别进行灭菌，然后再混合，避免形成沉淀；高压蒸汽灭菌后，培养基pH会发生改变(一般使pH降低)，可根据所培养微生物的要求，在培养基灭菌前后加以调整。
　　在配制培养基过程中，泡沫的存在对灭菌处理极不利，因为泡沫中的空气形成隔热层，使泡沫中微生物难以被杀死。因而有时需要在培养基中加入消泡沫剂以减少泡沫的产生，或适当提高灭菌温度。

烟草的培养基

在植物组织培养时，通过调节IAA和CTK的比值能影响愈伤组织分化出根或芽。CTK/IAA高时，愈伤组织分化芽。

CTK/IAA低时，分化根；CTK/IAA比例适中维持愈伤组织不分化。

愈伤组织诱导培养基制备

以MS培养基母液为基础，向洁净铝锅中顺序加入大量元素20×母液100mL,微量元素100×母液20mL,铁盐100×母液20mL ，维生素100×母液20mL，肌醇200×母液10mL,甘氨酸200×母液10mL，配制得MS培养基后，再加入0.5mg·L-1的BA8mL，0.5mg·L-1的NAA8mL。然后加入实际配制培养基体积约2/3-3/4的蒸馏水，加入40g蔗糖后搅拌使其溶化，用0.5mol·L-1的NaOH和0.5 mol·L-1的HCl调整pH值至5.8-6.0。加入14g琼脂，将铝锅置于电炉上,搅拌加热使琼脂*溶化，然后用蒸馏水定容至终体积2L，继续加热几分钟使之混合均匀后分装于三角瓶中。

烟草叶片愈伤组织诱导

烟草

取一无菌培养皿，用解剖刀切取1-2片无菌苗叶片置于无菌培养皿中，并用解剖刀将叶片切成2mm2左右的小片，然后将其接种于准备好的培养基上，每瓶接种5小片，一共接种6瓶。接种后的三角平置于24条件下黑暗培养1周，然后在同样温度下有光照和全黑暗下培养3周直至愈伤组织形成(两种情况各置3瓶)。观察愈伤组织诱导结果，统计愈伤组织诱导率。

器官分化及植株再生培养

将诱导的愈伤组织按类型分别转入分化培养基上,置于连续光照，温度20-22℃条件下培养3周，统计愈伤组织再生植株情况。

愈伤组织诱导的总体情况

烟草愈伤组织诱导培养4周后，愈伤组织基本形成，即排除因生长时间不够而未形成愈伤的情况。具体情况见表一中所示。6瓶培养物均有愈伤形成，且都未发生污染，但诱导率几乎各不相同。其中， 在光照条件下培养的3瓶平均愈伤诱导率为60.0℅，在黑暗条件下培养的3瓶平均愈伤诱导率为46.7%。由于实验过程中，外植体即烟草叶片取得偏小，接种时可能已有部分外植体的大部分细胞脱水死亡，使整个实验的愈伤组织诱导率偏低,愈伤块偏小。

动物细胞培养基

RPMI1640培养基是一个全营养型培养基，广泛应用于哺乳动物细胞和杂交瘤细胞的培养，如人骨髓瘤细胞、鼠杂交瘤细胞、人白细胞以及B细胞和T细胞。zui初设计用于悬浮细胞培养和人白血病细胞的单层细胞培养。