13820-Amplite™荧光法丙酮酸检测试剂盒

丙酮酸是细胞内代谢途径中的重要化合物。它源自称为糖酵解的葡萄糖代谢。一分子葡萄糖分解成两分子丙酮酸，从而通过两种方式之一为活细胞提供能量。当存在氧气（有氧呼吸）时，丙酮酸通过丙酮酸脱氢酶转化为乙酰辅酶A，丙酮酸脱氢酶进入柠檬酸循环（也称为Krebs循环）以生成ATP。当氧气不足时，丙酮酸会厌氧分解，从而在动物体内产生乳酸，在植物和微生物中产生乙醇。丙酮酸的异常水平，或乳酸与丙酮酸的浓度比可能与肝病或代谢异常有关，这是患者临床和其他实验室研究中的诊断指标。AAT Bioquest' s Amplite™比色丙酮酸测定试剂盒提供了灵敏的比色测定法，用于定量样品中的丙酮酸。它利用酶偶联反应释放过氧化氢，可通过丙酮酶传感器通过酶标仪在575 nm处检测到过氧化氢。

1. 准备测试样品（50 µL）以及连续稀释的丙酮酸标准液（50 µL）
2. 加入等体积的丙酮酸工作溶液（50 µL）
3. 在室温下孵育30分钟至1小时
4. 监测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度

5. 重要说明
   为了获得*效果，强烈建议使用黑色印版。使用前在室温下解冻套件组件。

   储备溶液的制备

   除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。

   1. Quest Fluor™丙酮酸盐传感器储备溶液（200X）：
   将50 µL DMSO（组分E）添加到Quest Fluor™丙酮酸盐传感器（组件A）中，制成200X Quest Fluor™丙酮酸盐传感器储备溶液。

   2.丙酮酸标准溶液（1 mM）：
   将10 µL 100 mM丙酮酸（组分D）添加到990 µL PBS（pH 7）中，得到1 mM丙酮酸溶液。

   配制标准溶液

   为了方便起见，请使用我们的系列稀释计

   将100 µL的1 mM丙酮酸标准溶液加入900 µL PBS中制成100 µM丙酮酸溶液（PS7）。然后执行1：3的系列稀释，以获得系列稀释的丙酮酸标准品（PS6-PS1）。

   准备工作溶液

   1.将5 mL测定缓冲液（组分C）加入一瓶酶混合1瓶（组分B1）中；混合均匀。
   
   2.将100μLddH ₂ O加入一个酶混合物2小瓶（组分B2）中；混合均匀。
   
   3.将整个小瓶（100μL）的Enzyme Mix 2和25 uL的200X Quest Fluor™丙酮酸传感器储备溶液转移到Enzyme Mix 1瓶中。拌匀 注意：丙酮酸工作溶液不稳定，应立即使用。避光。

   程序

   表1.黑色96孔微孔板中丙酮酸标准品和测试样品的布局。PS =丙酮酸标准溶液（PS1-PS7，0.1至100 µM）；BL =空白对照；TS =测试样品。

   BL	BL	TS	TS
   PS1	PS1	...	...
   PS2	PS2	...	...
   PS3	PS3
   PS4	PS4
   PS5	PS5
   PS6	PS6
   PS7	PS7

   表2.每个孔的试剂组成。

   好	体积	试剂
   PS1-PS7	50微升	连续稀释（0.1至100 µM）
   BL	50微升	PBS
   TS	50微升	样品

6. 根据表1和表2提供的布局，将丙酮酸标准液（PS），空白对照（BL）和测试样品（TS）制备成黑色的96孔微孔板。对于384孔板，请使用25 µL每孔试剂，而不是50 µL。
    
7. 在丙酮标准液，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL丙酮酸工作溶液，使丙酮酸测定总体积为100 µL /孔。对于384孔板，将25 µL工作溶液加到每个孔中，总体积为50 µL /孔。在pH值为6.5至7.0的条件下进行丙酮酸测定。
    
8. 将反应混合物在室温下孵育30分钟至1小时。
    
9. 使用荧光板读数器在Ex / Em = 540/590 nm（截止：570 nm）下监测荧光的增加。

   13820	Amplite™荧光法丙酮酸检测试剂盒	Amplite™ Fluorimetric Pyruvate Assay Kit	200 Tests
   13821	Amplite™比色法丙酮酸检测试剂盒	Amplite™ Colorimetric Pyruvate Assay Kit	200 Tests
   13825	Amplite™荧光法L-丙氨酸检测试剂盒	Amplite™ Fluorimetric L-Alanine Assay Kit	200 Tests
   13826	Amplite™比色法L-丙氨酸检测试剂盒	Amplite™ Colorimetric L-Alanine Assay Kit	200 Tests
   13827	Amplite™荧光法L-天门冬氨酸（天冬氨酸）检测试剂盒	Amplite™ Fluorimetric L-Aspartate (Aspartic Acid) Assay Kit	200 Tests