11503-Amplite™荧光法胞内辣根过氧化物酶检测

过氧化氢（H2O2）是一种活性氧代谢副产物，可作为许多氧化应激相关状态的关键调节剂。它涉及许多与哮喘，动脉粥样硬化，糖尿病性血管病变，骨质疏松症，许多神经退行性疾病和唐氏综合症有关的生物学事件。过氧化氢生物学有趣的方面也许是zui近的报道，即抗体具有将分子氧转化为过氧化氢的能力，有助于免疫系统的正常识别和破坏过程。对这种反应性物种的测量将有助于确定氧化应激如何调节各种细胞内途径。该Cell Meter™过氧化氢检测试剂盒使用我们*的OxiVision™Green过氧化氢传感器对活细胞中的过氧化氢进行定量。OxiVision™Green具有细胞渗透性，当它与过氧化氢反应时会发出绿色荧光。该套件是一种优化的“混合与读取”化验格式，与HTS液体处理仪器兼容。

1. 准备并添加Amplite™绿色过氧化物传感器工作溶液（50 µL）
2. 加入H ₂ O ₂标准品或测试样品（50 µL）
3. 在室温下孵育15-60分钟
4. 在Ex / Em = 490/525 nm（截止= 515 nm）时读取荧光强度

重要说明
开始实验之前，请在室温下解冻所有试剂盒组件。

活细胞分析的方案摘要

1. 在生长培养基中准备细胞
2. 用Amplite™绿色过氧化物传感器工作溶液对细胞染色，并孵育所需的时间
3. 用测试化合物处理细胞
4. 使用底部读取模式监控Ex / Em = 490/525 nm（截止= 515 nm）的荧光强度

重要说明
Amplite™绿色过氧化物传感器可以被动加载到活细胞中，并报告细胞内H ₂ O ₂浓度的微摩尔变化。以下是建议的显微镜成像协议，可以对其进行修改以满足特定的研究需求。

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。

1. Amplite™绿色过氧化物传感器原液（250X）：
将50 µL DMSO（组分D）添加到Amplite™绿色过氧化物传感器（组分A）的小瓶中，制成250X Amplite™绿色过氧化物传感器原液。避光。

2. H ₂ O ₂标准溶液（20 mM）：
将22.7 µL的3％H ₂ O ₂（0.88 M，组分B）添加到977 µL的测定缓冲液（组分C）中，制成20 mM H ₂ O ₂ 标准溶液。注意：稀释的H ₂ O ₂  标准溶液不稳定。未使用的部分应丢弃。

配制标准溶液

为了方便起见，请使用我们的系列稀释计

 向950 µL的测定缓冲液（组分C）中加入50 µL的20 mM H ₂ O ₂标准溶液，得到1000 µM H ₂ O _2的  标准溶液。取1000 µM H ₂ O ₂  标准溶液，并进行1：3连续稀释，以使用测定缓冲液（组分C）获得连续稀释的H ₂ O ₂标准溶液（HS1- HS7）。

准备工作溶液

将20μL250X Amplite™绿色过氧化物传感器原液添加到5 mL的测定缓冲液（组分C）中，制成Amplite™绿色过氧化物传感器工作液。

程序

在上清液反应中运行H ₂ O ₂分析：

表1.黑色96孔微孔板 中H ₂ O ₂标准品和测试样品的布局。HS = H ₂ O ₂标准品（HS1-HS7，300至0.3 µM）；BL =空白控件；TS =测试样品

表2.  每个孔的试剂组成。

1. 根据表1和表2提供的布局，准备H ₂ O ₂标准品（HS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50微升。
    
2. 向H ₂ O ₂标准品，空白对照和测试样品的每个孔中添加50 µL Amplite™绿色过氧化物传感器工作溶液，以使总H ₂ O ₂分析体积为100 µL /孔。对于384孔板，向每个孔中添加25 µL Amplite™绿色过氧化物传感器工作溶液，总体积为50 µL /孔。
    
3. 在避光条件下，于室温下孵育反应15至30分钟。
    
4. 使用荧光板读数器在激发= 490±10，发射= 520±10 nm（*Ex / Em = 490/525 nm，截止= 515 nm）下监控荧光增加。

在活细胞中进行H ₂ O ₂分析：

1. 根据需要激活单元格。
    
2. 用PBS缓冲液洗涤细胞，将细胞与100 µL /孔的Amplite™Green Peroxide Sensor工作溶液孵育5至60分钟或所需的时间。对于384孔板，请添加25 µL /孔的Amplite™绿色过氧化物传感器工作溶液。注意：为了进行动力学测量，可以在添加处理之前对细胞进行染色。
    
3. 使用荧光板读数器（底部读取模式）在Ex / Em = 490/525 nm（截止= 515 nm）下监视荧光的增加，或使用FITC通道使用荧光显微镜对荧光变化进行成像。

   11500	Amplite™ 比色法过氧化氢检测试剂盒	Amplite™ Colorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit	500 Tests
   11501	Amplite™荧光法过氧化氢检测试剂盒 *红色荧光*	Amplite™ Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Red Fluorescence*	500 Tests
   11502	Amplite™荧光法过氧化氢检测试剂盒 *近红外荧光*	Amplite™ Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Near Infrared Fluorescence*	500 Tests
   11503	Amplite™荧光法胞内辣根过氧化物酶检测试剂盒 *绿色荧光*	Amplite™ Intracellular Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Green Fluorescence*	200 Tests
   11504	Cell Meter™细胞内荧光法过氧化氢检测试剂盒 *蓝色荧光*	Cell Meter™ Intracellular Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Blue Fluorescence*	100 Tests
   11505	Cell Meter™细胞内荧光法过氧化氢检测试剂盒 *蓝色荧光适用于流式细胞仪*	Cell Meter™ Intracellular Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Blue Fluorescence Optimized for Flow Cytometry*	100 Tests
   11506	Cell Meter™细胞内荧光法过氧化氢检测试剂盒 *绿色荧光适用于流式细胞仪*	Cell Meter™ Intracellular Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit *Green Fluorescence Optimized for Flow Cytometry*	100 Tests