11305-Amplite™比色法超氧化物歧化酶（SOD）检测

超氧化物歧化酶（SOD）是一类催化超氧化物歧化为氧气和过氧化氢的酶。超氧化物是细胞中主要的活性氧之一。它是与神经退行性疾病，局部缺血再灌注损伤，动脉粥样硬化和衰老相关的病理学的主要贡献者。在几乎所有暴露于超氧自由基的细胞中，SOD都是重要的抗氧化剂防御措施。实际上，缺乏SOD1的小鼠会出现多种病理，包括肝细胞癌，与年龄有关的肌肉质量损失加速，白内障较早发生和寿命缩短。SOD的过表达保护鼠类纤维肉瘤细胞免于凋亡并促进细胞分化。Amplite™比色超氧化物歧化酶（SOD）分析试剂盒提供了一种快速灵敏的方法来测量溶液中的SOD活性。在测定中，黄嘌呤被黄嘌呤氧化酶（XO）转化为超氧自由基离子，尿酸和过氧化氢。超氧化物与SOD Orange™反应生成吸收约560 nm的产物。SOD抑制了SOD Orange™与超氧化物的反应，因此降低了560 nm处的吸收。SOD Orange™在560 nm处的吸收下降与SOD活性成正比。该试剂盒可以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行。超氧化物与SOD Orange™反应生成吸收约560 nm的产物。SOD抑制了SOD Orange™与超氧化物的反应，因此降低了560 nm处的吸收。SOD Orange™在560 nm处的吸收下降与SOD活性成正比。该试剂盒可以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行。超氧化物与SOD Orange™反应生成吸收约560 nm的产物。SOD抑制了SOD Orange™与超氧化物的反应，因此降低了560 nm处的吸收。SOD Orange™在560 nm处的吸收下降与SOD活性成正比。该试剂盒可以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行。

1. 准备SOD标准品或测试样品（50 µL）
2. 添加SOD工作溶液1（25 µL）
3. 添加SOD工作溶液2（25 µL）
4. 在室温下孵育30-60分钟
5. 监控560 nm处的吸光度

重要说明
开始实验之前，请在室温下解冻所有试剂盒组件。

储备溶液的制备

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。

1. SOD标准溶液（10 kU / mL）：
将50 µL测定缓冲液（组分E）加入小瓶SOD标准液（组分D）中，制成10 kU / mL标准溶液。

为了方便起见，请使用我们的系列稀释计

将10 µL的10 kU / mL SOD标准溶液添加到990 µL的测定缓冲液（组分E）中，以获得100 U / mL的SOD标准溶液（SD7）。取100 U / mL SOD标准溶液（SD7），并在测定缓冲液（E组份）中以1:10进行操作，以获得10 U / mL SOD标准溶液（SD6）。取10 U / mL标准溶液（SD6）并进行1：3连续稀释，以使用测定缓冲液（组分E）获得连续稀释的SOD标准液（SD5-SD1）。

准备工作溶液

1. SOD工作溶液1：
将2.5 mL测定缓冲液（组分E）添加到ReadiView ^TM SOD560 瓶（组分A）中并充分混合。然后将50μL的50X黄嘌呤（组分B）加到该瓶中制成SOD工作溶液1。  注意：   该SOD工作溶液1应在实验前制备，并避光。SOD工作溶液1不稳定，应丢弃未使用的部分。

2. SOD工作溶液2：
将50μL分析缓冲液（组分E）添加到小瓶黄嘌呤氧化酶（组分C）中并充分混合。然后，将50μL黄嘌呤氧化酶原液转移到2.5 mL测定缓冲液（组分E）中制成SOD工作液2。 

程序

表1.  在透明的底部96孔微孔板中的SOD标准品和测试样品的布局。SD = SOD标准品（SD1-SD7，0.041至100 U / mL）; BL =空白控件；TS =测试样品。

表2.  每个孔的试剂组成。

1. 根据表1和表2提供的布局，准备SOD标准液（SD），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。
    
2. 将25 µL SOD工作溶液1加入到SOD标准品，空白对照和测试样品的每个孔中，以使总测定体积为75 µL /孔。对于384孔板，将12.5 µL SOD工作溶液1加到每个孔中，总体积为37.5 µL /孔。
    
3. 将25 µL SOD工作溶液2加入到SOD标准液，空白对照和测试样品的每个孔中，以使总测定体积为100 µL /孔。对于384孔板，向每个孔中添加12.5 µL SOD工作溶液2，总体积为50 µL /孔。
    
4. 避光保存，室温下孵育反应30至60分钟。
    
5. 使用吸光度板读数器在550至560 nm处监测吸光度。

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