21601-Readiuse™快速发光法ATP检测试剂盒

三磷酸腺苷（ATP）在细胞能量，代谢调节和细胞信号传导中起着基本作用。ATP的定量可用于多种生物学应用。因为ATP是几乎所有活生物体的能量来源，但在没有活生物体的情况下会迅速降解，因此它的存在可以用来确定活生物体的存在。ATP的测量已用于细胞的细胞毒性，表面细菌的检测，水中细菌的定量，培养物中的体细胞和食品质量。McElroy*提出使用萤火虫生物发光法测量ATP，当时他发现ATP对于产生光至关重要。萤火虫萤光素酶是一种单体的61 kD酶，可催化萤光素的两步氧化，产生560 nm的光。di一步涉及通过ATP激活蛋白质，以生成反应性混合酸酐中间体。在第二步中，活性中间体与氧气反应生成瞬态二氧杂环丁烷，该瞬态二氧杂环丁烷迅速分解为氧化产物氧化荧光素和二氧化碳以及一束光。当ATP是限制性成分时，光强度与ATP浓度成正比。因此，可以使用光度计将光强度的测量结果用于定量ATP。AAT Bioquest的ReadiUse™快速发光ATP分析试剂盒（不含DTT）以即用形式提供了所有必需成分。它提供了一种快速，简单且均一的发光测定法，用于监测哺乳动物细胞中的细胞增殖和细胞毒性。该测定法是基于萤火虫荧光素酶对ATP和荧光素的催化释放而进行的ATP检测。它可以在化学发光酶标仪上以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行。该测定法极其灵敏，每孔可检测50个细胞。它具有稳定的发光信号，半衰期超过2小时。此ReadiUse™快速发光ATP分析试剂盒不使用DTT，从而消除了难闻的气味。

1. 用测试化合物（100 µL / 96孔板或25 µL / 384孔板）制备细胞（样品）
2. 加入等体积的即用型ReadiUse™快速光度ATP分析试剂（100 µL / 96孔板或25 µL / 384孔板）
3. 在室温下孵育10-20分钟
4. 监控发光强度

重要说明
为了获得*效果，强烈建议使用白板。开始实验前，在室温下解冻所有试剂盒的成分。

配制标准溶液

为了方便起见，请使用我们的系列稀释计

可选，不提供ATP。

用ddH2O或适当的缓冲液制备1 mM ATP储备溶液，然后进行系列稀释以达到10 pM至10 µM的ATP浓度。

程序

表1.白色96孔微孔板中ATP标准品和测试样品的布局。SD = ATP标准液，BL =空白对照，TS =测试样品

表2.  每个孔的试剂组成

1. 通过在所需的化合物缓冲液中加入10 µL的10X化合物（用于96孔板）或5 µL的5X化合物（用于384孔板）来用测试化合物处理细胞（或样品）。对于空白孔（没有细胞的培养基），添加相应量的化合物缓冲液。

2. 孵育细胞板在37 ^ø C，5％CO ₂培养箱中的所需时间，如24，48或96小时。

3. 加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的ReadiUse™快速光度ATP分析试剂。
    
4. 在室温下孵育10-20分钟。注意： 将未使用的ReadiUse™快速发光ATP分析试剂分装并储存在-20 ^o C，并避免重复的冷冻/解冻循环。

4. 使用标准发光计监控发光强度。

数据分析

4e+42e+48.0e+36.0e+34.0e+32.0e+3- 2 hr- 15 minData legendGenerated with Quest Graph™Cell (#/well)RLUX: 2.13e+3Hover mouse to interactY: 1.3e+4Y: 1.3e+4Y: 1.1e+4Y: 1.1e+4

从空白标准孔获得的读数（RLU）用作阴性对照。从其他标准的读数中减去该值即可得到基线校正值。然后，绘制标准读数，以获得标准曲线和方程式。该方程式可用于计算细胞样品