36200-Screen Quest™ Calbryte免丙磺舒和免洗钙

钙通量测定法是在药物开发中筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的方法。Screen Quest™Calbryte-590™无探针和免洗的钙含量测定试剂盒提供了zui稳定的基于均相红色荧光的测定，可检测细胞内钙的动员。表达感兴趣的GPCR（通过钙信号）的细胞预先装有我们专有的Calbryte-590 AM，可以穿过细胞膜。Calbryte-590 AM是用于HTS筛选的zui亮的钙指示剂。一旦进入细胞内，Calbryte-590 AM的亲脂性封闭基团就会被非特异性细胞酯酶裂解，产生带负电荷的荧光染料，并留在细胞内部，与钙结合后其荧光会大大增强。当细胞被筛选化合物刺激时，受体信号释放细胞内钙，大大增加了Calbryte-590 AM的荧光。Calbryte-590 AM具有出色的细胞滞留性，高灵敏度以及荧光增加100-250倍（当与钙形成复合物时）的特性，使其成为测量细胞钙的理想指标。Calbryte-590 AM是不需要丙磺舒以改善细胞保留能力的红色钙染料。Screen Quest™Calbryte-590™无探针和免洗的钙测定试剂盒提供了*化的测定方法，用于监测GPCR和脆弱或困难细胞系的钙通道。与基于绿色荧光的钙测定相比，该测定试剂盒对化合物库中有色化合物的干扰较小。它还与用于高含量分析的GFP细胞系兼容。该测定可以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并易于适应自动化。

组件

1. 在生长培养基中准备细胞
2. 添加Calbryte™590 AM染料加载溶液（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）
3. 在室温或37°C下孵育45-60分钟
4. 在Ex / Em = 540/590 nm处监控荧光

重要说明
使用前，请在室温下解冻所有套件组件。

储备溶液的制备

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。

1. Calbryte™590 AM储备溶液：
将20 µL（目录号36200）或200 µL（目录号36201和＃36202）的DMSO加入小瓶Calbryte™590 AM（组分A）中并充分混合。注意：20 µL Calbryte™590 AM储备溶液足以装一板。如果未密封的Calbryte™590 AM储备溶液可以将试管等分，则可在<  -20  ^o C的温度下等分一个月，然后保存  超过一个月。注意：避光，并避免重复的冻融循环。

2.测定缓冲液（1×）：
HHBS的混合9毫升（成分C，不包括在试剂盒  目录号36202。 ）被1个10X毫升的Pluronic ^®  F127加（10X）（成分B）和它们混合均匀。

准备工作溶液

Calbryte™590 AM染料加载溶液：
将20 µL Calbryte™590 AM储备溶液添加到10 mL的测定缓冲液（1X）中，并充分混合。 注意：  该工作溶液在室温下至少可稳定2小时。 注意：  10 mL染料加载溶液足以用于一块96孔板。

程序

1. 将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Calbryte™590 AM染料加载溶液添加到细胞板中。
    
2. 在细胞培养箱中将染料加载板孵育60分钟，然后在室温下将板再孵育15-30分钟。 注意：  如果测定需要37°C，请立即进行实验，而无需进一步室温孵育。如果细胞在室温下能长时间正常工作，则在室温下孵育细胞板1小时（建议孵育时间不超过2小时）。
    
3. 用HHBS或所需的缓冲液准备复合板。
    
4. 通过监测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度运行钙通量测定法。

   36201	Screen Quest™ Calbryte 590™免丙磺舒和免洗钙检测试剂盒	Screen Quest™ Calbryte-590™ Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit	10 Plates
   36202	Screen Quest™ Calbryte 590™免丙磺舒和免洗钙检测试剂盒	Screen Quest™ Calbryte-590™ Probenecid-Free and Wash-Free Calcium Assay Kit	100 Plates
   36300	Screen Quest™10X细胞染色缓冲液 *含酚红*	Screen Quest™ 10X cell staining buffer with Phenol Red Plus™	10 Plates
   36301	Screen Quest™10X钙离子检测缓冲液 *含酚红*	Screen Quest™ 10X calcium assay buffer with Phenol Red Plus™	10 Plates
   36305	Screen Quest™发光法钙离子检测试剂盒	Screen Quest™ Luminometric Calcium Assay Kit	10 Plates
   36306	Screen Quest™发光法钙离子检测试剂盒	Screen Quest™ Luminometric Calcium Assay Kit *10X10 Plates*	100 Plates