MDA-MB-231（人乳腺癌细胞）

细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

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操作步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
准备DMEM-H培养基(GIBCO,货号1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。也可根据实验需要选择悬浮培养基，使293T细胞悬浮生长。
培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
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细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。

营养琼脂表面接触皿55mm 英文名称： 产品规格：10个/包 产品用途：用于环境、器皿、设备和表面的无菌检测。用于环境、器皿、设备和表面的无菌检测。

含青霉素酶的TSA表面接触皿（55cm） 英文名称： 产品规格：10个/包 产品用途：用于环境、器皿、设备和表面的无菌检测。用于环境、器皿、设备和表面的无菌检测。

大豆酪蛋白琼脂（TSA）培养基平板（15cm） 英文名称： 产品规格：10个/包 产品用途：用于医药工业洁净室（区）沉降菌的测试用于医药工业洁净室（区）沉降菌的测试

马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）（新药典） 英文名称： 产品规格：250g 产品用途：用于霉菌,酵母菌计数（中国药典新标准）产品用途：用于霉菌,酵母菌计数（中国药典新标准）产品用法：称取本品 46.0g,加入 1000ml 蒸馏水中,115℃高压灭菌 20分钟,备用。灭菌好的培养基仅可重复加热熔化一次。贮存方法：请放置阴凉干燥处保存

液体硫乙醇酸盐培养基（不含琼脂） 英文名称：Thioglycollate Medium(without Agar) 产品规格：250g 产品用途：用于混浊制品需氧菌无菌试验（GB标准）用途:用于混浊制品需氧菌无菌检测。成分(g/L)酪胨(胰酶水解) 15.0酵母浸出粉 5.0葡萄糖 5.0硫乙醇酸钠 0.5L-胱氨酸 0.5氯钠 2.5pH值7.1 ± 0.2 25℃用法称取本品 28.5g,加热搅拌溶解于 1000ml 蒸馏水中,分装适宜容器,121℃高压灭菌 15 分钟迅速冷却。

0.5%葡萄糖肉汤培养基（2015药典） 英文名称：0.5% Glucose Brother Medium 产品规格：250g 产品用途：用于药品中硫酸链霉素等抗生素的无菌检查。用途:用于药品中硫酸链霉素等抗生素的无菌检查。成分(g/L)蛋白胨 10.0氯钠 5.0葡萄糖 5.0牛肉浸粉 3.0pH值7.2 ± 0.2 25℃用法称取本品 23.0g,加热溶解于 1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟,备用。

硫乙醇酸盐流体培养基（2015药典） 英文名称： 产品规格：250g 产品用途：用于药品，生物制品无菌试验，培养基，厌氧菌产品用法： 称取本品 29.25g,加热搅拌溶解于 1000ml 蒸馏水中,分装适宜容器 ,其装量与容器高度的比例应符合,培养结束后培养基氧化层 ( 粉红色 ) 不超过培养基深度的 1/2 。121℃高压灭菌 15 分钟迅速冷却。在供试品接种前,培养基氧化层高度不得超过培养基深度的 1/5 。否则,须经100℃水浴加热至粉红色消失( 不得超过 20 分钟 ),迅速冷却 ,只限加热一次,并应防止被污染。

改良马丁培养基 英文名称：Martin Broth,Modified 产品规格：250g 产品用途：用于药品及生物制品霉菌无菌检验用途:用于生物制品霉菌无菌试验。成分(g/L)蛋白胨 5.0磷酸氢二钾 1.0硫酸镁 0.5酵母浸出粉 2.0葡萄糖 20.0pH值6.4 ± 0.2 25℃用法称取本品 28.5g,加热溶解于1000ml 纯化水中,分装,121℃高压灭菌 15 分钟,备用。

改良马丁琼脂培养基 英文名称：Martin Agar Medium ,Medium 产品规格：250g 产品用途：用于药品及生物制品霉菌无菌检验用途:用于生物制品霉菌无菌试验。成分(g/L)蛋白胨 5.0磷酸氢二钾 1.0硫酸镁 0.5酵母浸出粉 2.0葡萄糖 20.0琼脂 14.0pH值6.4 ± 0.2 25℃用法称取本品 42.5g,加热搅拌溶解于 1000ml 纯化水中,分装,115℃高压灭菌 20 分钟,备用。

玫瑰红钠琼脂培养基 英文名称：Rose Bengal Agar Medium 产品规格：250g 产品用途：用于霉菌、酵母菌计数用途:用于霉菌和酵母菌计数。成分(g/L)蛋白胨 5.0磷酸二氢钾 1.0玫瑰红钠 0.0133硫酸镁 0.5葡萄糖 10.0琼脂 14.0pH值6.0 ± 0.2 25℃用法称取本品 31.5g,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟备用。

PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液（2015药典） 英文名称：Buffered Sodium Chloride – Peptone Solution 产品规格：250g 产品用途：用于制备药品样品的稀释液或冲洗液用途：用于制备药品样品的稀释液或冲洗液成分: (g/L)蛋白胨 1.0无水磷酸氢二钠 5.77磷酸二氢钾 3.56氯钠 4.3pH值 7.0用法称取本品 14.63g,加热溶解于1000ml 纯化水中,分装三角瓶,121℃高压灭菌 15 分钟备用。

营养琼脂培养基 英文名称：Nutrient Agar Medium 产品规格：250g 产品用途：用于药品中细菌总数计数用途：用于一般细菌培养、转种、复壮、增菌成分(g/L)蛋白胨 10.0牛肉浸出粉 3.0氯钠 5.0琼脂 14.0pH值7.2 ± 0.2 25℃用法：称取本品 32.0g ,加热溶解于 1000ml 纯化水中,分装三角瓶,121℃高压灭菌 15分钟,备用。

营养肉汤培养基（中国药典） 英文名称： 产品规格：250g 产品用途：用于药品中一般细菌的增菌培养产品用法：称取本品 25.0g ,加热溶解于 1000ml 蒸馏水中,分装,121℃高压灭菌 15 分钟,备用。

胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）（2015药典） 英文名称：Tryptose Soya Agar 产品规格：250g 产品用途：一种通用培养基，用于各种微生物的培养(2010,2015药典)用途:一种通用的营养培养基,用于各种微生物的培养。 （2010,2015药典）成分(g/L)胰酪胨 15.0大豆木瓜蛋白酶消化物 5.0氯钠 5.0琼脂 15.0pH值7.3 ± 0.2 25℃用法称取本品 40.0g ,加热搅拌溶解于 1000ml 纯化水中,分装三角瓶,121℃高压灭菌 15 分钟,备用。

MDA-MB-231(人乳腺癌细胞)多型性腺瘤基因样蛋白1(PLAGL1)elisa检测试剂盒 英文名称 ：PLAGL1 ELISA Kit，英文缩写：PLAGL1，

毒蕈碱型胆碱受体M2(CHRM2)elisa检测试剂盒 英文名称 ：CHRM2 ELISA Kit，英文缩写：CHRM2，

蛋白聚糖3(PRG3)elisa检测试剂盒 英文名称 ：PRG3 ELISA Kit，英文缩写：PRG3，

胆碱/乙醇胺磷酸转移酶1(CEPT1)elisa检测试剂盒 英文名称 ：CEPT1 ELISA Kit，英文缩写：CEPT1，

成纤维细胞生长因子受体2(FGFR2)elisa检测试剂盒 英文名称 ：FGFR2 ELISA Kit，英文缩写：FGFR2，

不均一核核糖核蛋白U(HNRPU)elisa检测试剂盒 英文名称 ：HNRPU ELISA Kit，英文缩写：HNRPU，

表睾酮(ET)elisa检测试剂盒 英文名称 ：ET ELISA Kit，英文缩写：ET，

半乳糖-3-O-磺基转移酶1(GAL3ST1)elisa检测试剂盒 英文名称 ：GAL3ST1 ELISA Kit，英文缩写：GAL3ST1，

白介素34(IL34)elisa检测试剂盒 英文名称 ：IL34 ELISA Kit，英文缩写：IL34，

白介素12A(IL12A)elisa检测试剂盒 英文名称 ：IL12A ELISA Kit，英文缩写：IL12A，

β-血小板球蛋白(βTG)elisa检测试剂盒 英文名称 ：βTG ELISA Kit，英文缩写：βTG，

V-Myc骨髓细胞瘤病毒癌基因同源物(MYC)elisa检测试剂盒 英文名称 ：MYC ELISA Kit，英文缩写：MYC，

Thimet脱寡肽酶1(THOP1)elisa检测试剂盒 英文名称 ：THOP1 ELISA Kit，英文缩写：THOP1，

Sideroflexin5蛋白(SFXN5)elisa检测试剂盒 英文名称 ：SFXN5 ELISA Kit，英文缩写：SFXN5，