50T-侵袭性大肠杆菌PCR检测试剂盒说明书

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
重胆(>98%,BR)Toll-like Receptor 9 (D9M9H) XP® Rabbit mAb5-氨基-2-甲氧基-6-甲基嘧啶

铬粒(>99%，BR)Toll-like Receptor 9 (D9M9H) XP® Rabbit mAb-甲

铬粉(>99%，BR)BIN1 Antibody甲基四氢酐

化铬六水(>98%,BR)NF-κB1 p105/p50 (5D10D11) Mouse mAb三亚基硫代酰

硫酸铬十二水PD-L1 (E1L3N®) XP® Rabbit mAb2-甲基吲哚-酸

硫酸铬(>98%,BR)PD-L1 (E1L3N®) XP® Rabbit mAb(3R)-吡咯烷-甲基氨酸叔丁酯

三氧化铬(>99%，BR)TRIAD1 Antibody-6-基-5-氟嘧啶

酸性红B5-HTR4 (D8O5K) Rabbit mAb2-吡基硫

直接黄12SUZ12 (D39F6) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)1-BOC-吡咯烷-甲酰

肉桂酰(>98%，BR)Phospho-DAPP1/BAM32 (Tyr139) (D7G4G) Rabbit mAb1-溴-2-甲氧基-

肉桂油U2AF1 (D6S3Q) Rabbit mAb聚二二环氧烷甲基

柠檬(>95%,Pract Grade)SimpleChIP® Mouse B-Myb Intron 2 Primers2-甲基-5-(三氟甲基)甲

柠酸(>98%,BR)Phospho-HS1 (Tyr397) (D12C1) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)1,2,3,四氢-1-萘甲酸

2---a-L-岩糖苷(>98%,BR)Syk (D3Z1E) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)2--5-三氟甲

六水硫酸钴铵(>98%,BR)Syk (D3Z1E) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)甲基缩水甘油

草酸钴(>99%,BR)p27 Kip1 (D69C12) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)氨基茴香硫

萘酸钴CD13/APN (E1Y7U) Rabbit mAb硝基茴香硫

刀豆素A(> 95%,BR)Syk (D3Z1E) XP® Rabbit mAb (Pacific Blue™ Conjuga)5-酰戊酸

肝素结合EGF样生长因子(HBEGF)ELISA试剂盒GRM2+GRM4  促代谢型谷氨酸受体2+4350 ul

肝素辅因子II-凝血酶(HCII-T)复合物ELISA试剂盒GRO Alpha/GRO-1  生长调节致癌基因-11 Kit

肝素辅因子Ⅱ(HCⅡ)ELISA试剂盒MIP2/GRO Beta/CXCL2  巨噬细胞炎症蛋白2（ GRＯβ）100 ul

肝X受体β(LXRβ)ELISA试剂盒GRO gamma/CXCL3  生长调节致癌基因gamma（GRＯγ）100 ul

肝X受体α(LXRα)ELISA试剂盒CXCL4/PF-4  血小板因子4100 ul

杆状病毒IAP重复包含蛋白2/3(BIRC2/3)ELISA试剂盒CXCL5  上皮中性粒细胞活化肽78100 ul

甘油三酯(TG)ELISA试剂盒GRP  促胃泌素释放肽100 ul

甘油-3 - 酸脱氢酶(GAPDH/G3PDH)ELISA试剂盒GRP78  葡萄糖调节蛋白78（热休克蛋白70蛋白5）100 ul

甘油二酯(DAG)ELISA试剂盒GRP94/gp96  葡萄糖调节蛋白9420 ul
侵袭性大肠杆菌PCR检测试剂盒说明书人内皮型一氧化氮合成酶(eS)ELISA试剂盒英文名称：Human Endothelial nitric oxide synthase,eS ELISA Kit*

人内皮型一氧化氮合成酶3(eS-3)ELISA试剂盒英文名称：Human α1-Acid glycoprotein,α1-AGP ELISA Kit*

人内皮抑素(ES)ELISA试剂盒英文名称：Human Endostatin，ES ELISA Kit 进口/原装

人内皮脂肪酶(EL)ELISA试剂盒英文名称：Human Endothelial lipase,EL ELISA Kit进口/原装

人内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(vaspin)ELISA试剂盒英文名称：Human Visceral adipose-specific serine protease inhibitor,vaspin ELISA Kit*

人内脂素/内脏脂肪素(visfatin)ELISA试剂盒英文名称：Human visfatin ELISA Kit *小鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA试剂盒      组装/原装

小鼠11β羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD)ELISA试剂盒      组装/原装

小鼠1,4,5-三磷酸肌醇（IP3）ELISA试剂盒      组装/原装

小鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βDglucosidase)ELISA试剂盒      组装/原装         
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。