产品详情
参数规格:产品仅用于科研
产品名称:甲型流感病毒核酸检测试剂盒(荧光PCR法)
货号:BJ-P964088
产品规格:50T
产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
产品特点:
◇高特异性:与其他病毒无交叉反应,无非特异性扩增;
◇高灵敏度:检测灵敏度可达10~100拷贝;
◇操作简便:该系列所有试剂均采用相同的体系和条件,可同时进行多个检测;
◇高通量:多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。
产品特点:
本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏 PCR检测试剂盒 。
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
PCR反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
#N/A Human CMV pp65 (495-503) trifluoroacetate salt 1mg Fructus kochiae地肤子LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度
#N/A Human CMV pp65 (495-503) trifluoroacetate salt 5mg Medulla junci灯心草LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度
2089288-03-7 AZD1390 5mg Medulla junci灯心草LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度
2089288-03-7 AZD1390 10mg Fructus oryzae germinatus稻芽LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度
2089288-03-7 AZD1390 50mg Fructus oryzae germinatus稻芽LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度
105637-50-1 ML 9 hydrochloride 100mg Porcine Reovirus猪呼肠孤病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 种源性检测/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度
105637-50-1 ML 9 hydrochloride 250mg Porcine Reovirus猪呼肠孤病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 种源性检测/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度
1056468-55-3 LP117 5mg Porcine Reovirus猪呼肠孤病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 种源性检测/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度
1056468-55-3 LP117 10mg Porcine Reovirus猪呼肠孤病毒RT-PCR试剂盒 种源性检测/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度
1056468-55-3 LP117 25mg Porcine Reovirus猪呼肠孤病毒RT-PCR试剂盒 种源性检测/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度
102089-74-7 Boc-D-Phenylglycinol 100g Rhizoma alpiniae officinarum高良姜染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度
102115-79-7 Pseudoprotodioscin 1mg Radix glycyrrhizae甘草染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度
102115-79-7 Pseudoprotodioscin 5mg Radix glycyrrhizae甘草染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度
102115-79-7 Pseudoprotodioscin 10mg Rhizoma zingiberis干姜染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度
102115-79-7 Pseudoprotodioscin 20mg Rhizoma zingiberis干姜染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度
汉坦病毒2型(HTV-2)核酸检测试剂盒1088991-73-4 MK 6096 5mg Haemophilus agni阿古尼嗜血杆菌LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度
1088991-73-4 MK 6096 25mg Crossiella equi马克洛菌LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度
1088991-73-4 MK 6096 100mg Crossiella equi马克洛菌LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度
1089115-06-9 Aripiprazole D8 1mg Infectious Bronchitis Virus(IBV)传染性支气管炎病毒RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度
1089115-06-9 Aripiprazole D8 5mg Infectious Bronchitis Virus(IBV)传染性支气管炎病毒RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
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