产品详情
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中文名称:超微量ATP酶测试盒(Na+K+、Ca2+Mg2+-ATP酶)
英文名称:Minim ATP enzyme test kit (Na + K +, Ca2 + Mg2 +-ATP enzyme )
产品规格:(测红细胞)150管/50样|(测红细胞)75管/25样|(测组织、普通细胞)150管/50样|(测组织、普通细胞)75管/25样
产品货号:LZ-01X8009
发货周期:1~3天
商品介绍:
检测指标:超微量ATP酶 本试剂盒可测各种动物红细胞、全血等样本中Na+K+ 、Ca2+Mg2+-ATP酶活性。ATP酶存在于组织细胞及细胞器的膜上,是生物膜上的一种蛋白酶,它在物质运送、能量转换以及信息传递方面具有重要的作用,机体在缺氧及一些疾病状态下,此酶活力发生一系列改变,另外有些遗传疾病也与此酶活力有关。 产品优点如下: 1、快速简便:全程约50分钟,可测100例左右样本。 2、取样量微:本法取样本量100ul。 3、稳定性好:试剂盒2~8℃存放6个月有效。 4、再现性好:变异系数CV=1.7%。 5、回收试验: X =103.3%。 6、受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强。 7、测试面广:可测动物组织、红细胞以及各种培养细胞、各种水产等,效果均佳。 |
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
ICOSLG Protein Mouse 重组小鼠 ICOS Ligand / B7-H2 / ICOSLG 蛋白 (His & Fc 标签)
CEA(Carcinoembryonic Antigen 0.5mgCEA(Carcinoembryonic Antigen )peptide 人癌胚抗原抗原
LDLR重组小鼠 LDLR / LDL Receptor 蛋白 (His 标签) Protein
GAPDH Protein Human 重组人 GAPDH 蛋白 (His 标签)
ACOX1重组人 ACOX1 / aox 蛋白 (His 标签) Protein
SCGB1A1重组小鼠 Uteroglobin / SCGB1A1 蛋白 (His 标签) Protein
Enah/Vasp样蛋白(EVL)重组蛋白 Recombinant Enah/Vasp Like Protein (EVL)
MAG重组人 MAG / GMA / Siglec-4 蛋白 (Fc 标签) Protein
IL5RA Protein Human 重组人 IL5Ra / CD125 蛋白 (His 标签)
GFRA1 Protein Rat 重组大鼠 GFRA1 / GFR alpha-1 蛋白 (His 标签)
Enah/Vasp样蛋白(EVL)重组蛋白 Recombinant Enah/Vasp Like Protein (EVL)
IL5RA Protein Human 重组人 IL5Ra / CD125 蛋白 (His 标签)
SCGB1A1重组小鼠 Uteroglobin / SCGB1A1 蛋白 (His 标签) Protein
GFRA1 Protein Rat 重组大鼠 GFRA1 / GFR alpha-1 蛋白 (His 标签)
MAG重组人 MAG / GMA / Siglec-4 蛋白 (Fc 标签) Protein
HA Protein H5N1 重组甲型流感 H5N1 (A/Japanese white-eye/Hong Kong/1038/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签)
生长激素诱导跨膜蛋白(GHITM)重组蛋白 Recombinant Growth Hormone Inducible Transmembrane Protein (GHITM)
IDS重组人 Iduronate 2-Sulfatase / IDS 蛋白 (His 标签) Protein
CPVL重组人 CPVL / Carboxypeptidase 蛋白 (His 标签) Protein
PVR Protein Human 重组人 CD155 / PVR 蛋白 (His 标签)
超微量ATP酶测试盒(Na+K+、Ca2+Mg2+-ATP酶)红色瑞恩氏酵母 4-苯肼-N-磺酰中性粒胞外诱捕网络Elisa
鸡伤寒沙门氏 N-苄基-2-乙酰一氧化氮合成Elisa
秦氏蜜环 5--3-羟基异噻唑核糖核酸A4Elisa
丁香假单胞杆番茄致病变种* 3-氟苯乙炔Disabled同源物1Elisa
红硬囊果青霉 二氟拉松β2糖原蛋白抗体Elisa
注意事项:
1、本试剂盒仅供科学研究使用,不可用于诊断或治疗。
2、螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖和管内壁上的液体离心至管底,避免开盖时试剂损失。
3、禁止与其他品牌的试剂混用,否则会影响使用效果。
4、样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
5、最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿,可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并*清除残留清洁剂。
6、避免皮肤或粘膜与试剂接触。
7、需长时间保存可-20℃避光保存。避免反复冻融,否则将会增加空白吸收,从而影响检测结果。最好小剂量分装,用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光。
8、用培养基或 PBS 来配制待检测药物。如果待测药物有还原性,则测定不含细胞,仅含有 MTS 的待测药物溶液在 490 nm处的空白吸光度。如果该吸光度很小,则可以直接加入 MTS ,如果吸光度相对较大,则需要除去培养基,并用新鲜培养基洗涤细胞两次,然后加入新的 100 μl 培养基和 10 μl MTS 进行检测。
9、细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
10、加 MTS 溶液后孵育时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定,对于大多数情况孵育 1 小时即可,白细胞需要培养较长时间。
11、如果不是使用 96 孔板检测,MTS 溶液的用量相应等比例增加即可。
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