超微量Ca2+Mg2+-ATP酶测定试剂盒(比色法)

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中文名称：超微量Ca2+Mg2+-ATP酶测定试剂盒(比色法)

英文名称：Ca2+Mg2+-ATPase assay kit
产品规格：(测红细胞)100管/50样|(测红细胞)50管/25样|(测组织、普通细胞)100管/50样|(测组织、普通细胞)50管/25样

产品货号：LZ-01X8061

发货周期：1～3天

商品介绍：

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

培养操作步骤：

1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 

ACY1 Protein Mouse 重组小鼠 ACY1 / Aminoacylase-1 蛋白 (His 标签)

CD34 CD34抗原(细胞表面的唾液粘蛋白 0.5mgCD34 CD34抗原(细胞表面的唾液粘蛋白)

PDCD1重组小鼠 PD1 / PDCD1 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

SRGN Protein Human 重组人 Serglycin / SRGN 蛋白 (His & Myc 标签)

PCNA重组人 PCNA 蛋白 (His 标签) Protein

FCGR3重组食蟹猴 CD16 / FCGR3 蛋白 (His & AVI 标签), Biotinylated Protein

MRP3(Multidrug Resistanec-Associated Protein 3 0.5mgMRP3(Multidrug Resistanec-Associated Protein 3) 多药耐药相关蛋白3(抗原)

HSPD1重组人 HSPD1 / HSP60 蛋白 (His & GST 标签) Protein

JTB Protein Human 重组人 Jumping Translocation Breakpoint / JTB 蛋白 (Fc 标签)

SMAD5 Protein Mouse 重组小鼠 Smad5 蛋白 (His & GST 标签)

MRP3(Multidrug Resistanec-Associated Protein 3 0.5mgMRP3(Multidrug Resistanec-Associated Protein 3) 多药耐药相关蛋白3(抗原)

JTB Protein Human 重组人 Jumping Translocation Breakpoint / JTB 蛋白 (Fc 标签)

FCGR3重组食蟹猴 CD16 / FCGR3 蛋白 (His & AVI 标签), Biotinylated Protein

SMAD5 Protein Mouse 重组小鼠 Smad5 蛋白 (His & GST 标签)

HSPD1重组人 HSPD1 / HSP60 蛋白 (His & GST 标签) Protein

HA Protein H5N1 重组甲型流感 H5N1 (A/barnswallow/HongKong/D10-1161/2010) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签)

加压素受体1B(AVPR1B)重组蛋白 Recombinant Arginine Vasopressin Receptor 1B (AVPR1B)

CD86重组人 CD86 / B7-2 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

CARTPT重组人 CART / CARTPT 蛋白 Protein

LRRTM4 Protein Human 重组人 LRRTM4 蛋白 (His 标签)
超微量Ca2+Mg2+-ATP酶测定试剂盒(比色法)麦芽糖假丝酵母 4-氮杂可溶性CD40分子Elisa

新月弯孢 Boc-5-戊酸γ丁酸受体Elisa

黄孢平革 2-乙酰基噻唑粘蛋白5B抗体Elisa

腐皮壳 磷酸一水合物磷酸二酯3AElisa

弗雷德里克斯堡假单胞 耐晒猩红RC钩端螺旋体Elisa

注意事项：

1、本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。

2、螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。

3、禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。

4、样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。

5、最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并*清除残留清洁剂。

6、避免皮肤或粘膜与试剂接触。

7、需长时间保存可-20℃避光保存。避免反复冻融，否则将会增加空白吸收，从而影响检测结果。最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光。

8、用培养基或 PBS 来配制待检测药物。如果待测药物有还原性，则测定不含细胞，仅含有 MTS 的待测药物溶液在 490 nm处的空白吸光度。如果该吸光度很小，则可以直接加入 MTS ，如果吸光度相对较大，则需要除去培养基，并用新鲜培养基洗涤细胞两次，然后加入新的 100 μl 培养基和 10 μl MTS 进行检测。

9、细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

10、加 MTS 溶液后孵育时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定，对于大多数情况孵育 1 小时即可，白细胞需要培养较长时间。

11、如果不是使用 96 孔板检测，MTS 溶液的用量相应等比例增加即可。