土壤酸性磷酸酶(S-ACP)测试盒(微量法)

公司产品仅供科研使用，下列是产品属性：

商品介绍：

测定意义：

土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响。通常按照其适pH范围，分为碱性、中性和酸性三种类型磷酸酶。

测定原理：

碱性环境中，S-AKP/ALP催化磷酸苯二钠水解生成ben酚和磷酸氢er钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-AKP/ALP活性。

自备仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水、无水乙醇和甲苯。
注意事项：

①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

②使用干净的塑料容器配置洗涤液。

③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

实验步骤：

(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀

(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次

(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)

(7)10,000rpm,4℃离心20min

(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃离心20 min

(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC处理水溶解

(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量

(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)

RBP4 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 RBP4 蛋白 (His 标签)

玻连蛋白(VTN)重组蛋白 Recombinant Vitronectin (VTN)

CNDP1重组小鼠 CNDP1 蛋白 (His 标签) Protein

CD96 Protein Human 重组人 CD96 蛋白 (His 标签)

PPCDC重组人 PPC-DC / PPCDC 蛋白 (His 标签) Protein

IL6重组食蟹猴 / 恒河猴 IL6 / Interleukin-6 蛋白 Protein

Matrixyl Acetate 五胜肽/美容肽—M肽 1gMatrixyl Acetate 五胜肽/美容肽—M肽

COQ7重组人 COQ7 蛋白 (His 标签) Protein

PTPN12 Protein Human 重组人 PTPN12 蛋白 (aa 1-355, His & GST 标签)

PLAT Protein Mouse 重组小鼠 tPA / PLAT 蛋白 (Fc 标签)

Matrixyl Acetate 五胜肽/美容肽—M肽 1gMatrixyl Acetate 五胜肽/美容肽—M肽

PTPN12 Protein Human 重组人 PTPN12 蛋白 (aa 1-355, His & GST 标签)

IL6重组食蟹猴 / 恒河猴 IL6 / Interleukin-6 蛋白 Protein

PLAT Protein Mouse 重组小鼠 tPA / PLAT 蛋白 (Fc 标签)

COQ7重组人 COQ7 蛋白 (His 标签) Protein

CXCL16 Protein Rat 重组大鼠 CXCL16 / SR-PSOX 蛋白 (Fc 标签)

AGEs 晚期糖基化终末产物AGEs 50mgAGEs 晚期糖基化终末产物AGEs

CHST3重组小鼠 CHST3 / C6ST-1 蛋白 (His 标签) Protein

KLRC1重组人 NKG2A / CD159A / KLRC1 蛋白 (His 标签) Protein

SEMA4A Protein Human 重组人 Semaphorin 4A / SEMA4A / Semaphorin B 蛋白 (Fc 标签)(Fc 标签)
土壤酸性磷酸酶(S-ACP)测试盒(微量法)BAX (Rabbit Bcl-2 Assaciated X protein) ELISA Kit 兔Bcl-2相关X蛋白 96T

Phospho-MKK7 (Ser271 + Thr275) 英文名称： 磷酸化原活化蛋白激酶MKK7抗体 0.1ml

Rhesus antibody Rh eIF4EBP1/4EBP1 eIF4E结合蛋白抗体 规格 0.1ml

Mouse trypsin ELISA Kit 小鼠胰Multi-class antibodies规格： 48T

Aurora A 英文名称： 有丝分裂激酶A抗体 0.1ml

Anti-Phospho- Beta-Catenin (Ser675) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化β 连环素蛋白抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

操作程序：

注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。

1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。

2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。

3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。

4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。

5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。

6.后固定：消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。

7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。

8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。

9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。

10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗

11.滴加化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。

12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。

13.滴加化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。

14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。

15.必要时苏木素复染，充分水洗。

16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。