土壤酸性转化酶(S-AI)测试盒(可见分光光度法)

商品介绍：

测定意义:

S-AI在pH 为4.5~5.0(酸性)条件下催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是土壤微生物蔗糖代谢关键酶之一。

测定原理：

S-AI催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在510nm有特征光吸收，在一定范围内510nm光吸收增加速率与AI活性成正比。

自备用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
公司产品仅供科研使用，下列是产品属性：

实验步骤：

(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀

(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次

(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)

(7)10,000rpm,4℃离心20min

(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃离心20 min

(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC处理水溶解

(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量

(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)

操作程序：

注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。

1．玻片的处理：一般采用多聚赖an酸或APES。切片厚度10-20μm。

2．细胞在多聚赖an酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。

3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。

4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。

5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。

6.后固定：消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。

7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。

8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。

9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。

10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗

11.滴加化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。

12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。

13.滴加化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。

14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。

15.必要时苏木素复染，充分水洗。

16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。

注意事项：

①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

②使用干净的塑料容器配置洗涤液。

③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

IL10RA Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 IL10RA 蛋白 (Fc 标签)

蛋白激酶Cη(PKCη)重组蛋白 Recombinant Protein Kinase C Eta (PKCh)

NCSTN重组小鼠 Nicastrin / NCSTN 蛋白 (His 标签) Protein

CHI3L2 Protein Human 重组人 CHI3L2 / YKL-39 蛋白 (His 标签)

VAMP3重组人 VAMP3 / Cellubrevin 蛋白 (His 标签) Protein

HA重组甲型流感 H5N1 (A/chicken/Yamaguchi/7/2004) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 标签) Protein

PENK/Enkephalin A(Preproencephalin A 0.5mgPENK/Enkephalin A(Preproencephalin A) 脑啡肽

SULT1B1重组人 SULT1B1 / ST1B2 蛋白 (His 标签) Protein

RIOK1 Protein Human 重组人 RIOK1 / RIO kinase 1 蛋白 (His & GST 标签)

PECAM1 Protein Human 重组人 CD31 / PECAM1 蛋白 (Fc 标签)

PENK/Enkephalin A(Preproencephalin A 0.5mgPENK/Enkephalin A(Preproencephalin A) 脑啡肽

RIOK1 Protein Human 重组人 RIOK1 / RIO kinase 1 蛋白 (His & GST 标签)

HA重组甲型流感 H5N1 (A/chicken/Yamaguchi/7/2004) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 标签) Protein

PECAM1 Protein Human 重组人 CD31 / PECAM1 蛋白 (Fc 标签)

SULT1B1重组人 SULT1B1 / ST1B2 蛋白 (His 标签) Protein

CSNK2A1 Protein Mouse 重组小鼠 CSNK2A1 / CK2A1 蛋白 (His & GST 标签)

Mafa(avian 0.5mgMafa(avian)(V-maf musculoaponeurotic fibrosarcoma oncogene homolog A) v-maf 肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A抗原

TNFSF8重组食蟹猴 CD153 / CD30L / TNFSF8 蛋白 (His 标签) Protein

FCGR3A重组人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Val, His & AVI 标签) Protein

SRI Protein Human 重组人 SRI / Sorcin 蛋白
土壤酸性转化酶(S-AI)测试盒(可见分光光度法)Fbg (Rabbit Fibrinogen) ELISA Kit 兔血纤蛋白原 96T

phospho-MBP(Thr232) 英文名称： 磷酸化髓鞘碱性蛋白抗体 0.1ml

Rhesus antibody Rh envelope glycoprotein (Yellow fever virus) 黄热病毒包膜糖蛋白抗体 规格 0.2ml

BMP-4(Mouse Bone morphogenetic protein 4) ELISA Kit 小鼠骨成型蛋白4Multi-class antibodies规格： 48T

ATRNL1 英文名称： ATRNL1蛋白抗体 0.2ml

Anti-CA125/FITC 荧光素标记卵巢癌抗原抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml