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钙离子荧光探针Cal-590 钾盐 生物试剂是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针,钙的测量对于许多生物学研究至关重要。荧光探针显示结合钙的光谱响应,使研究人员能够通过荧光显微镜,流式细胞仪,荧光光谱和荧光酶标仪研究细胞内游离钙浓度的变化。 Rhod-2于红色荧光钙指示剂中。然而,Rhod-2 AM在酯酶水解后仅在活细胞中发生中度荧光,并且具有非常小的细胞钙响应。 Cal-590 已被开发用于改善Rhod-2细胞负载和钙响应,同时保持Rhod-2的光谱波长,使其与TRITC /Cy3®过滤器组兼容。在CHO和HEK细胞中,Cal-590 AM具有比Rhod-2 AM更敏感的细胞钙响应。 Cal-590的光谱与FITC,AlexaFluor®488和GFP的光谱*分离,使其成为用GFP细胞系或FITC / AlexaFluor®488标记抗体复合细胞内检测的理想钙探针。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供的钙离子荧光探针Cal-590 钾盐 生物试剂。
使用Cal-520®AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM酯类
1.使用Cal-520®,Cal-590 或Cal-630 AM酯类:
AM酯是非极性酯,其可以容易地穿过活细胞膜,并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针加载到活细胞中。但是,使用AM酯时必须小心,因为它们易于水解,特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜(DMSO)。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下,AM酯应稳定数月。以下是我们推荐的将Cal-520®AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活细胞的方案。该方案仅提供指南,应根据具体实验修改。
a)在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Cal-520®AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的储备溶液。
b)在实验当天,将Cal-520®AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM 溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液(HHBS)或您选择的缓冲液中使用0.04%Pluronic®F-127制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。
注意:非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Cal-520®AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM 酯的水溶性。
c)如果您的细胞(如CHO细胞)含有有机阴离子转运蛋白,则可将丙*舒(1-2 mM)加入染料工作溶液中(浓度为0.5-1 mM)以减少渗漏。
d)将等体积的染料工作溶液(来自步骤b或c)加入细胞板中。
e)将染料加载板在细胞培养箱中孵育60至90分钟,然后将板在室温下再孵育30分钟。
注意:孵育染料超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。
f)用HHBS(如果适用)替换染料工作溶液,选择含有阴离子转运蛋白抑制剂(如1 mM丙*舒)的缓冲液,以去除多余的探针。
g)在Ex / Em = 490 / 525nm(对于Cal-520 AM),540 / 5000nm(对于Cal-590 AM)或600 / 640nm(对于Cal-630 AM )进行实验。
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