MX3236-50T-7-AAD 细胞周期检测试剂盒

7-AAD Cell Cycle Analysis Kit细胞周期检测试剂盒

产品信息

产品描述

7-AAD 细胞周期检测试剂盒（7-AAD Cell Cycle Analysis Kit）是一款采用7-AAD染色法进行细胞周期检测的试剂盒，通过流式细胞仪进行分析。本试剂盒通常用于贴壁细胞或悬浮细胞的细胞周期检测。对于组织样品，需经消化成单细胞后才可用此试剂盒进行检测。

7-氨基放线jun素D（7-Aminoactinomycin D,7-AAD）是一种不具有膜渗透性的DNA结合染料（选择性插入DNA的GC富集区），通常被活细胞排除在外。活细胞和早期凋亡细胞排斥7-AAD不被染色，但具损伤质膜或受损/无代谢活动的细胞无法阻挡染料进入而被染色。7-AAD/DNA复合物能被488nm的氩离子激发器，发生大的斯托克斯迁移，最大发射波长在647nm。细胞经7-AAD染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么，含双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度介于1-2（见附图I）。

产品组成

保存与运输方法

保存：染色缓冲液+4℃保存，7-AAD染色液+4℃避光保存，RNase A-20℃保存，一年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1） 因7-AAD也能结合RNA，因此，试剂盒内提供RNase A用来降解RNA，以降低背景荧光。然而，虽有资料显示，7-AAD不和RNA结合，但从我司的实验数据来看，添加RNase处理的效果更好。

2） 因7-AAD不具有细胞膜渗透性，则需先对细胞进行乙醇固定，再进行后续染色。

3） 请自行准备95%乙醇和PBS。

4） 荧光染料均存在荧光淬灭，保存和使用过程中请注意避光，以减缓淬灭。

5） 因7-AAD对人体有刺激性，请注意适当防护。

6） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

一、 染色步骤

1.1 细胞样品的准备：每个样品的细胞数量可以为500万以上。

a）对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一干净离心管内备用。用胰mei消化细胞，直至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000rpm离心3-5min，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果无法完quan离心至管底，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心速度。小心吸除上清，可以残留约50µl左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1ml 冰浴预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。再次加入1ml冰浴预冷的PBS，重悬细胞。

b）对于悬浮细胞：1000rpm离心5min沉淀细胞。对于特定的细胞，如果无法完quan离心至管底，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心速度。小心吸除上清，可以残留约50µl左右的培养液，以避免吸走细胞。加入1ml 冰浴预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5ml离心管内。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50µl左右的PBS，以避免吸走细胞。再次加入1ml冰浴预冷的PBS，重悬细胞。

c）对于组织样本：用剪刀将组织剪成尽量小的小块后，用0.25%胰mei消化30-60min（或根据实际情况选择适当的混合酶来进行组织消化），经过200-400目细胞筛网过滤得到单细胞悬液。然后参照步骤b）对于悬浮细胞来准备样品。

1.2 细胞固定：取4ml冰浴预冷的95%乙醇，一边低速涡旋震荡的同时逐滴加入1ml细胞悬液（冰上操作），混匀后于4℃固定2h或更长时间，固定12~24h可能效果更佳。1500rpm离心5min沉淀细胞。对于特定的细胞，如果无法完quan离心至管底，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心速度。小心吸除上清，可以残留约50µl左右的乙醇固定液，以避免吸走细胞。加入约5ml冰浴预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50µl左右的PBS，以避免吸走细胞。轻轻弹动离心管底以分散细胞避免细胞成团。

1.3 7-AAD染色工作液的配制：参照下表根据实际检测样本的数量配制足量的7-AAD染色工作液【注意：7-AAD染色工作液短时间可4℃保存，但需当日使用】。

1.4 染色：每管细胞样品中加入0.1ml 7-AAD染色工作液，缓慢并充分重悬细胞沉淀，37℃避光孵育30min。随后可置于4℃或冰浴避光存放。

1.5 加入2ml PBS，1500rpm离心5min，去上清。

1.6 加入500μl PBS，流式细胞仪上机检测。【请在24h内完成流式检测，最好能在当天完成流式检测。】

1.7 流式检测与分析：用流式细胞仪在激发波长488nm处检测红色荧光（7-AAD通道或PerCP通道），同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行DNA含量和光散射分析。

【注意】：j上机时，荧光通道设置为线性放大（Linear Scale）；k数据分析，去除粘连细胞。

相关产品

附图I.典型的7-AAD细胞周期示例图（参考用）

— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。

7-AAD 细胞周期检测试剂盒细胞增殖7-AAD 细胞周期检测试剂盒细胞增殖