山li醇氧化酶（SOX)测定试剂盒,微板法

山li醇氧化酶（SOX)测定试剂盒,微板法

山li醇氧化酶（SOX)测定试剂盒,微板法

本试剂盒仅供科研使用 1 山*醇氧化酶（SOX）测定试剂盒说明书 （货号：WS2750W 微板法 48 样） 一、产品简介： 山*醇作为一种运输糖，被卸载到果实中时转化成其他糖类物质，山*醇氧化酶 （sorbitol oxidase，SOX）就是山*醇转化和利用过程中的关键酶之一，该酶与果实的 品质以及果实中糖类物质的积累密切相关。 山*醇氧化酶（SOX）催化山*醇生成葡萄糖，葡萄糖进一步与 3,5－二硝基水杨酸 反应，生成棕红色氨基化合物，经光谱扫描在 540nm 有特征光吸收，在一定范围内 540nm 光吸收增加速率与山*醇氧化酶（SOX）活性成正比。 二、试剂盒的组成和配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 60mL×1 瓶 4℃保存 试剂一 液体 7mL×1 瓶 4℃保存 试剂二 粉剂 mg×1 支 4℃保存 用前加入 2.5mL 蒸馏水充分溶解 备用；用不完的试剂 4℃保存; 试剂三 液体 10mL×1 瓶 4℃保存 标准品 粉体 mg×1 支 4℃保存 若重新做标曲，则用到该试剂 三、所需的仪器和用品： 酶标仪、96 孔板、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。 四、山*醇氧化酶（SOX）活性测定： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1、样本制备： 称样本 0.1g（水分充足的样本可取 0.5g）于研钵中，加入 1mL 提取液，冰浴匀浆后 转入离心管中。12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取 2、上机检测： 1 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 540nm。 2 在 EP 管中依次加入： 试剂名称（μL） 测定管 对照管 样本 20 20 试剂一 60 80 试剂二 20 混匀，30℃（水浴锅或恒温培养箱）下孵育 30min 试剂三 100 100 混匀，沸水浴（95-100℃）（可用封口膜缠紧 EP 管）5min， 流水冷却 蒸馏水 200 200 混匀，取出 200μL 至 96 孔板中，于 540nm 处读取吸光值 A， △A=A 测定-A 对照（每个样本自身需做一个自身对照）。 【注】：1.若吸光值大于 1.8，可减少样本加样量 V1（如减至 10μL，则试剂一相应增加），则改 变后的加样体积 V1 需代入计算公式重新计算。本试剂盒仅供科研使用 2 2.若ΔA 值在零附近徘徊，可延长 30℃水浴时间（如增至 60min），则改变后的反应时间 T 需代入公式重新计算。 五、结果计算： 1、标准曲线方程为 y = 0.0125x - 0.0338；x 为标准品质量（μg），y 为ΔA。 2、按蛋白浓度计算： 单位定义：37℃每毫克蛋白每分钟产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活性单位。 山*醇氧化酶（SOX）（μg/min/mg prot）=[(ΔA+0.0338) ÷0.0125]÷(V1×Cpr ) ÷T =133.3×(ΔA+0.0338) ÷Cpr 3、按鲜重计算： 单位的定义：37℃每克组织每分钟产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活性单位。 山*醇氧化酶（SOX）（μg/min/g 鲜重）=[(ΔA+0.0338) ÷0.0125]÷(W×V1÷V) ÷T =133.3×(ΔA+0.0338)÷W V----加入提取液体积，1mL； V1----加入反应体系中样本体积，0.02mL； T----反应时间，30min； W----样本鲜重，g； Cpr----样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒； 附：标准曲线制作过程： 1 制备标准品母液（5mg/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1mL 蒸馏水（母液需在两天 内用且-20℃保存）。 2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 1, 2, 3, 4, 5. mg/mL。也可根据实际样本来 调整标准品浓度。 3 按照测定管的加样顺序依次加样操作，根据结果即可制作标准曲线。