ZC111D-SURE电转感受态细胞

SURE 电击感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。使用pUC19质粒检测，转化效率高达10cfu/μg DNA 以上。基因型为:endAl glnV44 thi-1 gyrA96 relA1 lac recBrecJ sbcC umuC::Tn5 uvrC e14-Δ(mcrCBhsdSMR-mrr)171 F'[ proAB' lacIq lacZΔM15 Tn10]

产品特点:

克隆不稳定 DNA结构，克隆颠倒重复的DNA 和Z-DNA等;适合克隆甲基化 DNA;

具有 Kana 和 Tet抗性;ANB

用于蓝白斑筛选。

操作步骤:

以下操作均按无菌条件的标准进行:

1.0.1cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5min待其沥千水分,正置5min,使乙醇充分挥发,待乙醇挥发干净立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5cm 以方便盖上杯盖,冰中静置5min充分降温。2.取-70℃保存的SURE 电击感受态细胞插入冰中5min,待其融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手boda离心管底轻轻混匀,避免产生气泡,立即插入冰中。A.测定转化效率使用1μl 0.1ng/μl 的对照质粒pUC19;

B.对于连接产物,请用乙醇沉淀DNA后加入适量TE缓冲液(10mM Tris-HCl,pH7.5;1mM EDTA)重悬DNA浓度不超过100ng/μl,体积

.加入 DNA 时体积不应大于感受态体积的1/10。

2.电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡,气泡会增加弧光放电风险。

3.DNA加入到细胞中后,立即进行电击操作;电击完成后立刻加上LB或SOC等复苏培养基,每分钟延迟加入

会导致3倍转化效率的降低。

4.电击杯里的离子可增加溶液的电导,增大在含有细胞和DNA的溶液中产生电流和弧光放电的风险。

5.当 DNA 不纯或存在盐,乙醇,蛋白及缓冲液等污染时,转化效率急剧下降。

6.若转化大质粒或想获得较高转化效率,推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍,转化效率下降

一个数量级。

7.对于连接产物转化,最好转化前乙醇沉淀DNA后用适量TE缓冲液(10mM Tris HCl, pH7.5 1mM

EDTA)重悬产物,保证DNA浓度不超过100ng/ul过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率.

增加弧光放电的风险。

8.混入质粒时应轻柔操作,吸取感受态细胞时不可用孔径过小的枪头(普通200μl枪头应剪去枪头尖0.6cm)

避免用力过猛,以免剪切力过大损伤细胞膜,降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终

用于涂板的菌量。

9.电击感受态细胞最好保存在-70℃以下,高于-70℃超期储存会导致转化效率下降。