ZC109D-DB3.1电转感受态细胞

DB3.1电击感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。此感受态细胞是采用特殊工艺处理得到的感电击感受态细胞。该细胞含有gyrA462 基因，对ccdB基因产物的毒性具有抵抗作用，适用于转化和扩增包含ccdB基因的质粒载体。使用pUC19质粒检测，转化效率高达10°cfu/μg DNA

以上。基因型为:FgyrA462 endA1 Δ(srl-recA) mcrB mrr hsdS20(r, me) supE44ara-14 galK2lacY1 proA2 rpsL20(Sm") xyl-5λ- leu mtl1产品特点:

适用于转化和扩增包含ccdB基因的质粒载体;ANBN具有liusuanlianmeisu抗性;转化效率10cfu/μg DNA 以上。

操作步骤:

以下操作均按无菌条件的标准进行:

1.0.1cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5min待其沥干水分,正置5min使乙醇充分挥发，

待乙醇挥发干净立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖,冰中静置5min充分降温。

2.取-70C保存的DB3.1电击感受态细胞插入冰中5min,待其融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手

boda离心管底轻轻混匀,避免产生气泡,立即插入冰中。

A.测定转化效率使用1ul 0.lng/ul的对照质粒pUC19;

B.对于连接产物,请用乙醇沉淀DNA后加入适量TE级冲液(10mM Tris-HCl, pH7.5; 1mM EDTA)重悬,

DNA 浓度不超过100ng/μl,体积不超过5μl/50μl感受态。

3.用200μl枪头(用刀切除0.5cm枪尖)将感受态-DNA混合物快速移到电击杯中,避免产生气泡,盖上杯盖。

4.启动电转仪,设置参数:C=25μF,PC=200Ω,V=1.8kV(BioRad电转仪推荐参数);也可按所用电转仪推荐的参

数操作。将电击杯快速放入电转槽中,电击完成快速插入冰中。

5.2min后从冰中取出电击杯,放室温,加入700ul不含抗生素的无菌S.O.C.培养基(室温),用1ml 枪吹吸电击

杯底部数次混匀后,转移到50ml离心管(BD Falcon50ml 锥形离心管等),向离心管中补加S.O.C.培养基至10ml

倾斜 45度放入摇床,37℃,225rpm复苏60min。

6.5000rpm 离心1min 收菌,重悬后取100-200μl涂布到含相应抗生素的S.O.C平板上(因菌量较大,若全部涂

板请选用直径 15cm 培养皿2-5个)。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养13-17h。