ZC108D-Stbl3电转感受态细胞

菌株是实验室zuichangyong的感受态细胞。电击感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。缺失核酸内切酶(endA1)，提高了质粒DNA的产量和质量;重组酶缺陷型(recA1)减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA的稳定性。lacZAM15的存在可进行基于a互补原理上的蓝白斑筛选实验。电转感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率可达1x10cfu/μg DNA。基因型为:FmcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)ф80 lacZAM15 AlacX74 recAl araΔ139A(ara-leu)7697 galU galKrps L(str)endA1 nupG

操作方法:1.电极间距为 0.1cm 的电转杯(Gene Pulser®/MicroPulserT™electroporation cuvettes)插入碎冰中，压实冰面,冰中静置5分钟,使电转杯充分降温。(电转杯重复使用方法:每次用完后,用大量的自来水冲洗干净去掉菌液和DNA,用蒸馏水洗3遍,将其泡在75%乙醇中30分钟,取出杯子,沥干液体,放在超净台中,使乙醇充分挥发,盖上盖子放干燥地方备用)。2.取-70℃保存的感受态细胞插入冰中,待细胞刚化冻后,加入质粒DNA或连接产物(洗脱或溶解质粒的溶液中离子不能太高,或用双蒸水稀释,对照pUC19可以用无菌水稀释到10pg/μl,用手指boda管底轻轻混匀,立即插入冰中,在超净台中用无菌吸头将细胞/DNA混合物快速转移到电击杯中,避免产生气泡,确保细胞沉到杯底,盖上杯盖,空管保留待用。3.启动电转仪,设置电击参数:2.4kV,200Ω,25μF(BTX ECM 630或Bio-Rad GenePulser)。用纸巾擦掉电转杯外部的水分,将电转杯放入电转槽中进行电击。完成后,将电转杯插入冰中,加入950μl 无抗生素的 SOC 或 LB培养基,并将液体转移到原来保留的感受态空管中,37℃,150-250rpm 振荡培

养1小时。4.取 100-200μl左右的菌液或稀释后的菌液,涂布于含相应抗生素的LB平板上,倒置放于37℃培养箱培养 12-18小时。