产品详情
液相内毒素清除剂/质粒提取子科现货
英文名:DNA-EZ Reagents P Endotoxin-Be-Gone
规格:5毫升/支
运输及保存:常温运输,4°C 保存
液相内毒素清除剂/质粒提取子科现货产品简介及特点:去除液体生物样品(包括质粒 DNA 样品)中污染的内毒素(endotoxin)具有重要的临床意义,因为内毒素对原代细胞、传代细胞和整体动物均具有显著的毒性作用。由于内毒素(化学本质为脂多糖,即 lipopolysaccharides)是包括 E.coli 在内的革兰氏阴性细菌细胞壁的主要组成成分,并且带电性跟 DNA 类似,所以从 E.coli 细胞中提取的质粒 DNA 和重组蛋白质药物中常常含有大量的内毒素污染,并且很难用用常规方法(包括硅胶膜吸附,离子交换吸附、凝胶排阻过滤、氯化铯超速离心)去除。子科生物液相内毒素清除剂就是专门用于高效去除生物样品中的内毒素污染。
1. 简单快速,一次处理只需要 20 分钟左右,不需要复杂仪器设备。
2. 高效,一次处理可以去除 90%以上的内毒素,经过三次重复抽提可将内毒素的水平降低到 0.2 EU (endotoxin unit,约 0.1 ng LPS)/ml 以下。
3. 适用范围广,可用于 DNA、RNA、蛋白质或其他生物样品。
4. 不影响 DNA和绝大部分蛋白质的活性,处理过的质粒 DNA 可用于转染实验。
5. 既可小规模使用(在 1.5 ml 离心管内),也可放量使用。
使用方法
如果使用前本产品有分层,冰浴后振荡混匀。
1. 用于体积小于 500 μl 的 DNA/RNA 样品
a. 在一干净的离心管中加入 500 μl 的样品。如果不足 500 μl,可以用水或 TE 补足。
b. 加入 50 μl 的 3 M 醋酸钠(pH 5.2),混匀后冰浴 5 分钟。
c. 加入 50 μl 预冷的本产品,充分混匀后冰浴 10 分钟。
d. 65°C 水浴直到溶液变浊或出现分层为止(一般需要 1-5 分钟)。
e. 室温 12000-15000×g 离心 2 分钟(不能低温离心),离心后上层为无色透明,下层为淡蓝色。
f. 将上清转移到新的离心管中。
g. 如果需要,可以重复步骤 c~f。
h. 加 1 倍体积的异丙醇或两倍体积的乙醇,混匀, 15000×g 离心 30 分钟。
i. 弃上清后用 70%酒精洗 2 次。
j. 空气干燥沉淀后加入 100 μl 无内毒素的水或 TE 缓冲液溶解沉淀。
k. 测定 DNA 和内毒素的含量,与未纯化的样品比较。
2. 用于体积大于 500 μl 的 DNA/RNA 样品
整个操作同上,只是在 15 或 50 ml 塑料离心管中进行,离心速度不能超过离心管的承受力。
3. 整合到碱变性法质粒 DNA 制备过程中整个操作同上,只是:
a. 样品必须是加溶液 III 离心后得到的上清液。
b. 可以略去第 b 步操作。
c. 第 6 步以后可以重复步骤 c~f 几次,也可以直接用试剂盒提供的或自备的上柱液调整盐离子浓度,然后上柱,以后的操作按试剂盒提供的操作手册进行。与柱吸附相关溶液都必须无内毒素污染。
4. 对蛋白质和其它生物样品整个操作同上,只是:
a. 略去第 b 步操作,加 3 M 醋酸钠(pH 5.2)只为沉淀核酸。
b. 第 d 步改为 37°C 保温以免蛋白质变性,溶液呈混浊状或分相一般需要 20-30 分钟。
c. 略去第 h 步和以后操作。
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100克
500克
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