XB1967-人大肠癌细胞

人大肠癌细胞

PA319

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传代方法：
1．悬浮生长细胞传代
离心法传代：离心（1000转/分）去上清，沉淀物加新培养液后再混匀传代。v2．半悬浮生长细胞传代（Hela细胞）
此类细胞部分呈现贴壁生长现象，但贴壁不牢，可用直接吹打法使细胞从瓶壁脱落下来，进行传代。
3．贴壁生长细胞传代
采用酶消化法传代。常用的消化液有0.25％的胰蛋白酶液。
细胞核:
　　细胞质里含有一个近似球形的细胞核（nucleolus），是由更加黏稠的物质构成的。细胞核通常位于细胞的*，成熟的植物细胞的细胞核，往往被*液泡推挤到细胞的边缘。细胞核中有一种物质，易被洋红、苏木精、甲基绿等碱性染料染成深色，叫做染色质（chromatin）。生物体用于传种接代的物质即遗传物质，就在染色质上。当细胞进行有丝分裂时，染色质就变化成染色体。
细胞核:
　　细胞质里含有一个近似球形的细胞核（nucleolus），是由更加黏稠的物质构成的。细胞核通常位于细胞的*，成熟的植物细胞的细胞核，往往被*液泡推挤到细胞的边缘。细胞核中有一种物质，易被洋红、苏木精、甲基绿等碱性染料染成深色，叫做染色质（chromatin）。生物体用于传种接代的物质即遗传物质，就在染色质上。当细胞进行有丝分裂时，染色质就变化成染色体。
原代细胞（primary culture cell）是指从机体取出后立即培养的细胞。有人把培养的第1代细胞与传10代以内的细胞统称为原代细胞培养。
　　原代细胞（primary cell） 动物组织经胰蛋白酶等消化，分散，获得单个细胞，再生长于培养皿中。大多数组织可以制备原代细胞，但生长的快慢及难易程度不一。肾和睾丸zui常用，甲状腺细胞生长较慢，只用于某些特定的病毒如猪传染性肠胃炎病毒的培养。
　　实验步骤
　　1．人无菌室之前用肥皂洗手，用75％酒精擦拭消毒双手。
　　2．倒置显微镜下观察细胞形态，确定细胞是否需要传代及细胞需要稀释的倍数。将培养用液置37℃下预热。
　　3．超净台台面应整洁，用0.1％新洁尔灭溶液擦净。
　　4．打开超净台的紫外灯照射台面20min左右，关闭超净台的紫外灯，打开抽风机清洁空气，除去臭氧。
　　5．点燃酒精灯；取出无菌试管，巴士德吸管和刻度吸管；安上橡皮头；过酒精灯火焰略烧后插在无菌试管内。
　　6．将培养用液瓶口用75％酒精消毒，过酒精灯火焰后斜置于酒精灯旁的架子上。
　　7．倒掉培养细胞的旧培养基。酌情可用2—3mLHanks液洗去残留的旧培养基，或用少量胰酶涮洗一下。
　　8．每个大培养瓶加入1mL胰酶，小瓶用量酌减，盖好瓶盖后在倒置显微镜下观察，当细胞收回突起变圆时立即翻转培养瓶，使细胞脱离胰酶，然后将胰酶倒掉。注意勿使细胞提早脱落入消化液中。
　　9．加入少量的含血清的新鲜培养基，反复吹打消化好的细胞使其脱壁并分散，再根据分传瓶数补加一定量的含血清的新鲜培养基（7～10mL／大瓶，3～5mL／小瓶）制成细胞悬液，然后分装到新培养瓶中。盖上瓶盖，适度拧紧后再稍回转，以利于CO2气体的进入，将培养瓶放回CO2培养箱。
　　10．对悬浮培养细胞，步骤7-9不做。可将细胞悬液进行离心去除旧培养基上清，加入新鲜培养基，然后分装到各瓶中。