HFL-I（MEMα）（胚肺成纤维细胞）说明书

HFL-I（MEMα）（胚肺成纤维细胞） 细胞潜伏期（latent phase）：细胞接种后，先经过一个在培养液中呈悬浮状态的悬浮期.此时，细胞质回缩，胞体呈圆球形.然后细胞贴附于载体表面，称贴壁，悬浮期结束. 细胞贴壁速度与细胞种类，培养基成分，载体的理化性质等密切相关。一般情况下，原代培养细胞贴壁速度慢，可达0-24 小时或更多,而传代细胞系贴壁速度快，通常0-30 分钟即可贴壁。细胞贴壁后还需经过一个潜伏阶段，才进入生长和增殖期.原代培养细胞潜伏期，约24-96 小时或更长，连续细胞系和肿瘤细胞潜伏期短，仅需6-24 小时。
细胞指数增生期（logarithmic growth phase） 这是细胞增殖zui旺盛的阶段，分裂相细胞增多。指数增生期细胞分裂相数量可作为判定细胞生长是否旺盛的一个重要标志。通常以细胞分裂相指数（Mitotic index,MI）表示，即细胞群中每000 个细胞中的分裂相数。一般细胞的分裂指数介于0.%-0.5%，原 代细胞分裂指数较低，而连续细胞和肿瘤细胞分裂相指数可高达3%－5%。HFL-I（MEMα）（胚肺成纤维细胞）指数增生期的细胞是细胞活力时期，是进行各种实验时期，也是冻存细胞的时机。在接种细胞数量适宜情况下，指数增生期持续3－5 天后，随着细胞数量不断增多、生长空间减少，zui后细胞相互接触汇合成片。

 正常细胞相互接触后能抑制细胞运动，这种现象称接触抑制现象（contact inhibition）。而恶性肿瘤细胞无接触抑制现象，能继续移动和增殖，导致细胞向三维空间扩展，使细胞发生堆积（piled up）。细胞接触汇合成片后，虽然发生接触抑制，但只要营养充分，细胞仍能进行增殖分裂，因此细胞数仍然在增多。但是，当细胞密度进一步增大，培养液中营养成分减少，代谢产物增多时，细胞因营养枯竭和代谢产物的影响，导致细胞分裂停止，这种现象称密度抑制现象（Density Inhibition）。

 培养细胞注意事项:

    实验进行前，无菌室及无菌操作台（laminarflow）以紫外灯照射30-60分钟灭菌，以70%ethanol擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转0分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70%ethanol擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转0分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。

     无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。实验用品以70%ethanol擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在抬面之*无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。

小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。

工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台（至少ClassⅡ）。操作过程中，应避免引起aerosol之产生，小心毒性药品，例如DMSO及TPA等，并避免尖锐针头之伤害等。
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