树脂包埋（透射电镜）实验代测

树脂包埋（透射电镜）实验代测

树脂包埋是将客户处理后固定在电镜固定液中的标本，进行修整、锇酸后固定、脱水等过程后，采用进口812环氧树脂作为包埋剂，将组织标本包埋在树脂中。经过此种树脂包埋的样本适合进行超薄切片，透射电镜观察。

服务说明

树脂包埋实验步骤：

1、取材：电镜取材非常严格，取材过程中速度要快，5分钟内要将组织取出放入固定液中；取材组织块要小，一般要求将组织切成1立方毫米大小；取材部位要准确、取材温度要低是在4℃条件下进行；取材工具要干净，锋利。如果是贴壁细胞不可用酶消化下来，先吸去培养液然后加入电镜固定液用橡胶块刮下细胞，离心，细胞体积保证绿豆大小即可，然后吸去上清更换固定液继续固定。

2、固定：取材后要及时固定，组织、细胞、蛋白等固定选用2.5%中性戊二醛固定液，植物等标本则需要选用多聚甲醛和戊二醛的混合固定液。室温固定两小时左右后，放入4℃保存运输（如果是植物或者肺组织，则需要进行真空抽气固定，一般需要抽气固定24小时左右，直至标本*沉入容器底部）。

3、锇酸后固定：将标本从固定液中取出，用0.1mol/L的PB清洗并过夜，第二天转入1%锇酸后固定，固定时间普通标本2h左右，植物标本8至12h左右。

3、脱水：锇酸固定后的标本用用0.1mol/L的PB清洗后使用梯度乙醇脱水，浓度依次是50%、70%、80%、90%、95%、*，植物标本则会在50%乙醇前面再增加一个30%乙醇梯度，脱水时间普通标本为10~15min，植物标本脱水时间为1~1.5h

4、浸透：用丙酮作为乙醇和树脂间的过度溶剂，从纯丙酮开始，中间经过丙酮和树脂的混合剂，混合比例丙酮从高到低到纯树脂，整个浸透过程需要1~2天完成。

5、包埋：先将组织对应的标签放包埋板中，然后加入树脂，再将浸透好的样本放入包埋板中，调整好包埋面，然后放入恒温箱内熟化，熟化过程需要2~3天。熟化完成后，样本树脂包埋完成。

树脂包埋（透射电镜）实验代测

注意事项

1、透射电镜对取材要求严格，取材过程中速度要快，5分钟内要将组织取出放入固定液中；取材组织块要小，一般要求将组织切成1立方毫米大小；取材部位要准确、取材温度要低，是在4℃条件下进行；取材工具要干净，锋利。如果是贴壁细胞不可用酶消化下来，先吸去培养液然后加入电镜固定液用橡胶块刮下细胞，离心，细胞体积保证绿豆大小即可，然后吸去上清更换固定液继续固定。

2、2.5%戊二醛固定液要选择在保质期内（固定液变黄不可用），固定液的量要足够，至少是组织的10倍以上，如果组织固定过程中固定液明显变黄也需要更换一次固定液；植物组织要选择戊二醛和多聚甲醛的混合固定液；植物和肺组织由于标本本身含有大量气体，会导致固定液无法进入标本内部达不到充分固定，所以需要真空抽气固定。

3、树脂包埋的样本可以常温保存，但是由于树脂会吸潮变软，所以在切片前需要提前放入60℃恒温箱中烘烤12小时及以上，样本烘烤时不能被密封，需要单独放入纸盒或者金属盒中。

4、样本在取材、固定、运输等过程中不可冰冻、结冰，结冰会对样本的超微结构造成冰晶损伤。